[發(fā)明專利]一種人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210238190.1
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102732484A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周克元;李濤;李彩虹;冀天星;黃穎;林碧華;張鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12N5/095
• 分類號: C12N5/095
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 羅曉林;李志強(qiáng)

1.一種人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，包括以下步驟：

（1）?獲得單細(xì)胞狀態(tài)的人鼻咽癌細(xì)胞；

（2）?將步驟（1）得到的單細(xì)胞狀態(tài)的人鼻咽癌細(xì)胞加入含表皮生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基中，得單細(xì)胞懸液；

（3）?將步驟（2）中的單細(xì)胞懸液濃度調(diào)整至900～1100個/ml；

（4）?將步驟（3）得到的單細(xì)胞懸液接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中，再加入等體積干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)72～96h；

（5）?收集步驟（4）所得細(xì)胞，胰酶消化至單個細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

2.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述步驟（1）中使用的人鼻咽癌細(xì)胞為對數(shù)期人鼻咽癌細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述步驟（1）中使用的人鼻咽癌細(xì)胞為CNE-2、SUNE-1或HONE-1。

4.如權(quán)利要求1或3所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述步驟（1）中使用的人鼻咽癌細(xì)胞為CNE-2。

5.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基為DMEM/F12。

6.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述含表皮生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基中表皮生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度均為10～30?ng/ml。

7.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述步驟（4）中的所述細(xì)胞培養(yǎng)板為六孔板。

8.如權(quán)利要求7所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，向所述六孔板中加入的單細(xì)胞懸液的量為1～2ml/孔。

9.如權(quán)利要求1所述的人鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞系的建立方法，其特征在于，所述步驟（5）中的所述胰酶的質(zhì)量體積百分比濃度為0.25%。