[發明專利]一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210238082.4
• 申請日: 2012-07-11
• 公開（公告）號: CN103540650A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 阮承邁;孫衛華;王志剛
• 申請（專利權）人: 北京合康源生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：

NE反應體系和熒光探針；

或NE反應體系和熒光染料。

2.根據權利要求1所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括連續記錄熒光信號的儀器。

3.根據權利要求1所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括定量PCR儀或熒光檢測儀。

4.根據權利要求1所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的NE反應體系為通用反應緩沖液或系列反應緩沖液；所述的通用反應緩沖液其成分包括Tris·HCl，濃度為10-100mM，pH范圍為5～9.5，還含有濃度為1mM-20mM的Ca²⁺、Zn²⁺或Mg²⁺；所述系列反應緩沖液指分別針對單一酶設計的緩沖液組分，每組2-5種，其區別在于設計不同的pH值，使同一樣品在不同pH值下測定活性比，對照標準品獲得酶種類信息；所述的熒光探針為一寡聚核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團；探針完整時，報告熒光基團發射的熒光信號被淬滅熒光基團吸收；所述的熒光染料是指能特異性地摻入DNA雙鏈，在激發光下發射熒光信號，而不摻入鏈中的染料分子不會發射任何熒光信號的物質，當NE把DNA雙鏈降解后，發射的熒光信號減弱。

5.根據權利要求4所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的通用反應緩沖液其成分包括Tris·HCl，濃度為20-50mM，pH范圍為5.4～8.5，還含有濃度為2mM-10mM的Ca²⁺、Zn²⁺或Mg²⁺。

6.根據權利要求4所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述NE反應體系和熒光染料中，NE反應體系需事先加入DNA標準品，用量為1-500ng/μl。

7.根據權利要求4所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的熒光探針為長度10-30bp的寡聚核苷酸序列，5’末端標記發色基團，包括但不限于FAM、TET、HEX、TAMRA、ROX、CY5、CY3、JOE，3’末端標記淬滅基團，包括但不限于BHQ-1、BHQ-2、Eclipse、DABCYL；探針的使用量為每反應1μM～20μM。

8.根據權利要求7所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的熒光探針的使用量為每反應2μM～10μM。

9.根據權利要求4所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，所述的熒光染料包括但不限于pico?green、SYBR系列熒光染料，熒光染料在NE反應體系中應用濃度為1ng-100ng/100ul(0.1～10X)。

10.根據權利要求1-9任一權利要求所述的一種疫苗中非特異性核酸內切酶活性檢測試劑盒，其特征在于，檢測步驟如下：取反應緩沖液，加入熒光探針或熒光染料，放置冰上，3-5min后，加入酶樣品；同時設置陽性對照和空白對照；放入熒光檢測儀器，事先設定儀器溫度為25℃或37℃，啟動記錄程序，記錄20-30min內熒光信號變化。