[發明專利]百合試管小鱗莖誘導方法

有效

• 申請號: 201210237261.6
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102754598A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 邱利文;張國禹;黃桂云;馬曉波;胡梅香;吳笛;張海波
• 申請（專利權）人: 中國長江三峽集團公司;長江三峽生態園林有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

技術領域

本發明涉及一種百合的快速繁育方法，具體涉及一種百合小鱗莖的誘導方法。

背景技術

長期以來，百合一直以傳統的分球、?分珠芽、鱗片扦插、?鱗片包埋等方式進行繁殖，存在繁殖系數小、種性退化、病毒積累等不足。?

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的就是要提供一種縮短組培苗生產時間，降低成本，有效地脫去植株體內病毒，防止種性退化，培育成本低的百合小鱗莖的誘導方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種百合小鱗莖的誘導方法，包括以下步驟：

1）鱗片低溫處理：選擇生長健壯百合鱗莖球，洗凈后冷藏7-10天；

2）外植體殺菌：將經低溫貯藏的百合鱗莖球剝去外面的1-2層鱗片，選取內部鱗片為外植體，將外植體洗凈后在超凈工作臺上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，并用無菌水沖洗后將鱗片置于無菌濾紙上，切成方塊接種于分化培養基上啟動培養；

3）啟動培養：將接種有的外植體的分化培養基置于環境條件為溫度25±1℃、濕度75±2%、光照14h、光照強度1800-2000lx的恒溫培養室內，培養15天后從百合切口處及腹部邊沿脫分化產生白色團狀愈傷組織，繼續通過20天的培養，白色團狀愈傷組織上再分化叢生芽；

4）鱗莖誘導培養：當叢生芽長到3-5cm時，將叢生芽分割成小單芽后進行壯苗培養，將健壯幼苗置于10℃光照培養箱內處理14d，再轉接到鱗莖誘導培養基中，將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置于恒溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導，通過45天培養誘導出鱗莖。

步驟2）和3）所述的分化培養基配方是：

Ms+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉5g/L。

步驟4）中所述的鱗莖誘導培養基的配方是：

?Ms+6-BA0.5?mg/L?+NAA0.1?mg/L?+蔗糖30?g/L+瓊脂粉5?mg/L。

步驟1）選用外植體鱗莖球低溫處理時冰箱的冷藏溫度為5℃，時間7-10天。

步驟4）中將轉接有健壯幼苗的鱗莖誘導培養基置于恒溫培養室內進行試管內百合小鱗莖誘導時，恒溫培養室內的溫度為10±1℃、濕度75±2%、光照14h、光照強度1800-2000lx.。

本發明提供的百合小鱗莖的誘導方法，具有以下有益效果：

1、百合用經低溫貯藏的百合鱗莖為外植體，接種在培養基啟動誘導叢生苗；再將叢生苗以10℃低溫處理14d后，轉接到鱗莖誘導培養基誘導試管小鱗莖，比直接誘導產生叢生芽，試管內不形成健壯小鱗莖移栽成活高，成本費用低。

2、百合直接從試管誘導小鱗莖，可將小鱗莖直接煉苗移栽，大大縮短組培苗生產時間，降低成本。

3、百合通過不斷試管繼代培養誘導產生小鱗莖，能有效地脫去植株體內病毒，防止種性退化。

具體實施方式

分化培養基制備：以Ms為基本培養基，培養基內添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養基內的添加的激素組合是：6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L；

鱗莖誘導培養基制備：以Ms為基本培養基，培養基內添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養基內的添加的激素組合是：6-BA0.5?mg/L?+NAA0.1?mg/L。

其中：6-BA是6-芐基腺嘌呤、NAA是奈乙酸、IBA是吲哚丁酸。

誘導過程實例：

1）鱗片低溫處理：選擇生長健壯百合鱗莖球，洗凈后置于5℃冰箱進行冷藏7-10天左右；

2）外植體殺菌：將經低溫貯藏的鱗莖剝去外面的1-2層鱗片，選取內部鱗片為外植體，將外植體置于5%洗衣粉溶液中浸泡10min并清洗，再置于流水沖洗1h，沖洗后在超凈工作臺上先用75%酒精浸泡30s，經0.1%升氯化汞液（單位1g/L）消毒15min，再用無菌水沖洗5次，沖洗后的外植體鱗片置于無菌濾紙上，切成1cm²方塊接種于分化培養基上啟動培養；

3）啟動培養：將接種有外植體的分化培養基置于環境條件為溫度25±1℃、濕度75±2%、光照14h、光照強度1800-2000lx的恒溫培養室內，培養15天后從百合切口處及腹部邊沿脫分化產生白色愈傷組織，繼續通過20天的培養白色團狀愈傷組織上再分化叢生芽；

4）鱗莖誘導培養：當叢生芽長到3-5cm時，分割成小單芽后進行壯苗培養，將健壯幼苗置于10℃光照培養箱內處理14d，再轉接到鱗莖誘導培養基后，再置于入恒溫培養室進行試管內小鱗莖誘導，恒溫培養室內的溫度為10±1℃、濕度75±2%、光照14h、光照強度1800-2000lx.。通過45天培養誘導出鱗莖的平均鮮重達到1.4g/個，鱗莖顏色呈乳白色，叢生苗煉苗移栽成活率達到90%以上，小苗生長健壯。