[發明專利]一種基因工程細胞及其在NK細胞擴增中的應用有效
| 申請號： | 201210237023.5 | 申請日： | 2012-07-10 |
| 公開（公告）號： | CN102911918A | 公開（公告）日： | 2013-02-06 |
| 發明（設計）人： | 朱詩國;王艷麗 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學醫學院 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218 | 代理人： | 翟羽;施春花 |
| 地址： | 200025 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因工程 細胞 及其 nk 擴增 中的 應用 | ||
1.一種基因工程細胞，其特征在于，所述基因工程細胞為4-1BBL-mbIL-21-GEC，其細胞膜表面穩定表達4-1BB配體和膜固定IL-21。
2.根據權利要求1所述的一種基因工程細胞，其特征在于，所述基因工程細胞為4-1BBL-mbIL-21-K562細胞。
3.?權利要求1所述的基因工程細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
?（1）構建4-1BBL表達的轉座子；
（2）4-1BBL轉座子與轉座酶SB11共轉染相應細胞，流式細胞分選，獲得4-1BBL穩定表達細胞4-1BBL-GEC；
（3）在步驟（2）獲得的4-1BBL-GEC基礎上導入在細胞膜表面穩定表達的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21-GEC。
4.根據權利要求3所述的基因工程細胞的制備方法，其特征在于，所述基因工程細胞為4-1BBL-mbIL-21-K562細胞。
5.?權利要求1或2所述的基因工程細胞在NK細胞擴增中的應用。
6.?一種NK細胞擴增方法，其特征在于，利用權利要求1所述基因工程細胞進行擴增，包括以下步驟：
（1）構建4-1BBL表達的轉座子；
（2）4-1BBL轉座子與轉座酶SB11共轉染相應細胞，流式細胞分選，獲得4-1BBL穩定表達的細胞4-1BBL-GEC；
（3）在步驟（2）獲得的4-1BBL-GEC?基礎上導入在細胞膜表面穩定表達的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21?-GEC；
（4）致死性照射或絲裂霉素處理步驟（3）獲得的基因工程細胞，按2:?1與外周血單核細胞混合，在NK細胞擴增培養液中共培育；
（5）每周重復刺激1次，連續數周，以獲得足夠量的NK細胞。
7.?根據權利要求6所述的一種NK細胞擴增方法，其特征在于，所述基因工程細胞為4-1BBL-mbIL-21-K562細胞。
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