[發明專利]加速黃柄鵝膏菌絲體生長的優化培養方法

有效

• 申請號: 201210237012.7
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102696404A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 李宗菊;張曦予;何雋;唐萍;李彪;周文;吳鵬;趙昱;馮遼遼
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種加速黃柄鵝膏（Amanita?flavipes）菌絲體生長的培養方法，屬于生物技術領域，具體地說是屬于大型真菌室內培養范疇。

背景技術

鵝膏菌屬（Amanita）隸屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、鵝膏菌科（Amanitaceae），是有毒的大型真菌中較特殊、較有價值的一個世界性廣布大屬，其物種多樣性是非常豐富的，全球已報道近400種，中國已記錄的近100種（含亞種、變種及變型）。鵝膏菌屬中的大部份種屬于著名劇毒菌，因此，鵝膏的價值在于其毒素。鵝膏菌毒素可分為四類，其中最主要也是最重要的是肽類毒素，肽類毒素又包括鵝膏毒肽（amatoxins）、鬼筆毒肽（phallotoxins）和毒傘素類（virotoxins）三種。鵝膏毒素的應用研究主要體現在以下幾方面：①可用于研究真核生物基因的表達、調控及細胞定位；②可開發抗菌、抗病毒、抗腫瘤、鎮靜麻醉及其它特效新藥；③可用于生物防冶。

鵝膏菌屬大多屬于外生菌根真菌，目前尚不能人工栽培，難以開發利用。雖然已有少數的種能進行菌絲的純培養，但也存在一些問題，如菌絲生長緩慢、菌絲中毒素含量不高。鵝膏多肽毒素是一種由7-8個被修飾了的稀有氨基酸組成的環肽,可能不是基因編碼的直接產物,而是經過加工后的次級產物,?要克隆毒素的基因是復雜而困難的，且其化學合成品也沒有活性。因此，至今國內外還沒有一種能規?；_發的毒素產品?，F作為生化試劑的肽類毒素全部來源于歐美的毒鵝膏(Amanita?phalloides)子實體，銷價昂貴。

鵝膏種群小，個體少，產量低，分布數量極其有限。加之對生境敏感，一旦生境受到破壞，極易消失或滅絕，屬于特殊的致危生物類群，這更增加了其進一步被研究、利用的難度。

鵝膏的人工馴化或栽培是保證鵝膏資源可持續性利用的前提或關鍵，但此目前仍然屬于難以攻克的問題及盲點，其中菌絲難以誘導，菌絲生長非常緩慢是制約及影響人工培養的重要環節或因素。

黃柄鵝膏菌(Amanita?flavipes?Imai)?是鵝膏屬中的一個廣布種，主要分布于云南、四川、西藏（東南部林區），其形態特征如下：子實體較小或中等；菌蓋直徑3-7.5cm，初期卵圓形，后扁平至近平展，褐色到黃褐色，中央色深而向邊緣色淺呈黃色，表面濕時粘附有暗黃或金黃色塊狀粉質鱗片；菌肉白色，近表皮下褐黃色；菌褶白色帶黃色，離生，不等長，較密；菌柄較長，柱形，向下漸粗，長7-10cm，粗0.6-1cm，淡黃且上部白色帶黃色，基部呈球形且有環帶狀金黃色斑紋或粉末狀菌托殘痕，內部松軟至空心；菌環膜質，黃色，生柄之中上部，上表面有細條紋；孢子形狀從寬橢圓形至近卵圓形，光滑，無色，7.5-10μm×5-7.5μm，糊性反應。?本發明以云南武定獅子山自然保護區采集的黃柄鵝膏菌為材料，成功分離到了該種的菌絲，但菌絲生長非常慢，難以擴繁，本發明征對此問題進行了重點突破。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種簡單，生產成本低，能促進菌絲快速生長的固體培養方法。

本發明的技術方案，其步驟為：

?（1）材料的選擇：野外采摘生長優良、無蟲害、未開傘或未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；

（2）材料的消毒及處理：將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄等部位，除去表面泥沙或土，將子實體從菌蓋中部一分為四，用解剖刀取菌柄與菌蓋交接處的內部組織塊，切成約0.08～0.16cm²的小塊；

（3）菌絲體誘導：將以上切分的小組織塊輕輕嵌入試管斜面誘導培養基（馬鈴薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、NH₄NO₃?0.30～0.40g/L、谷氨酸?0.28～0.32?g/L、V_B1?0.10mg/L、麥芽汁?150?ml/L、瓊脂11.00g/L，控制PH值為5.4左右）表面，培養溫度為21～22℃，暗培養14～18天，菌塊周圍開始萌發出極少白色菌絲，53～60天，組織塊多處隆起，表面長出團狀、稠密的絨毛狀白色菌絲；

（4）菌絲體均一性與擴大培養：將上面誘導出的菌絲體從試管中轉接入培養皿(?誘導培養基)，在溫度為21～22℃下，經過38～40天的暗培養，培養皿中形成直徑2.5～3.0cm的圓形規則菌落，用直徑1.0?cm的圓形打孔器取菌落邊緣同一生長期的菌塊進行擴大培養，每35～36天擴大培養一次；