[發明專利]黃柄鵝膏與共生植物室內共生關系的建立方法

有效

• 申請號: 201210236992.9
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102715089A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 李宗菊;張曦予;何雋;李彪;周文;吳鵬;趙昱;馮遼遼
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G7/06;A01G1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種黃柄鵝膏與共生植物滇青岡室內共生關系的建立方法，屬于生物技術領域，具體地說是屬于植物組織培養及大型真菌菌絲體培養范疇。

背景技術

鵝膏菌屬（Amanita）隸屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、鵝膏菌科（Amanitaceae），是有毒的大型真菌中較特殊、較有價值的一個世界性廣布大屬。鵝膏菌屬中的大部份種屬于著名劇毒菌，主要含鵝膏毒素，鵝膏毒素在研發抗菌抗病毒、抗腫瘤、鎮靜麻醉等新藥方面具有潛在應用，因而成為了近年的研究熱點。

鵝膏菌屬絕大部分屬于外生菌根真菌，目前尚不能進行人工栽培，難以開發利用，其子實體的生長發育與共生植物關系密切，因此鵝膏菌和其共生植物的生物學關系的研究，是進一步探討鵝膏菌子實體發生機制的可行途徑。

黃柄鵝膏菌(Amanita?flavipes?Imai)?是鵝膏屬中的一個廣布種，在云南武定獅子山分布較多，主要與殼斗科的滇青岡、元江栲（Castanopsis?orthacantha）等闊葉樹共生，滇青岡(Cyclobalanopsis?glaucoides?)為殼斗科(Fagaceae)、青岡屬(Cyclobalanopsis?Oerst.)植物，在獅子山闊葉林地上可以收集較多的滇青岡種子，因此本發明以滇青岡種子及黃柄鵝膏子實體為材料，成功地建立了黃柄鵝膏與滇青岡的室內共生關系，為今后共生機理及鵝膏子實體發生的機制研究等提供了技術貯備。

發明內容

本發明的目的在于，在室內或可控條件下建立一種簡單穩定、互利互惠的黃柄鵝膏與滇青岡植物的共生關系。

實現本發明的技術方案：利用殼斗科滇青岡植物種子，成功得到了無菌苗及盆栽苗，利用黃柄鵝膏子實體誘導了菌絲體，將菌絲體分別接種到無菌苗及盆栽苗根部，室內建立了二者的共生關系，實現本發明的主要步驟如下：

（1）黃柄鵝膏菌絲體的誘導及培養：野外采摘生長優良、無蟲害、未開傘或未完全開傘、菌柄較粗壯、菌蓋較肥厚的成熟子實體；將子實體帶回實驗室，于超凈臺上用酒精棉球，輕擦菌蓋表面及菌柄等部位，除去表面泥沙或土，將子實體從菌蓋中部一分為四，用解剖刀取菌柄與菌蓋交接處的內部組織塊，切成約0.08～0.16cm²的小塊；將以上切分的小組織塊輕輕嵌入試管斜面誘導培養基（馬鈴薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、NH₄NO₃?0.30～0.40g/L、谷氨酸?0.28～0.32?g/L、V_B1?0.10mg/L、麥芽汁?150?ml/L、瓊脂11.00g/L，控制PH值為5.4左右）表面，培養溫度為22～23℃，暗培養14～18天，菌塊周圍開始萌發出極少白色菌絲，53～60天，組織塊多處隆起，表面長出團狀、稠密的絨毛狀白色菌絲；將以上誘導的菌絲轉入培養皿中，用擴大培養基（馬鈴薯100.00～120.00g/L、葡萄糖9.00～12.00g/L、滇青岡腐葉干粉（過80～100目分樣篩）30.00～50.00g/L、生境土干粉（過80～100目分樣篩）60.00～80.00g/L、蛋白胨?3.00～5.00?g?/L、NH₄NO₃?0.60～0.80g/L、6-BA1.20～1.50mg/L、麥芽汁200～230?ml/L、瓊脂6.00～8.00?g/L，控制PH值為5.4左右）進行擴大培養；