[發(fā)明專(zhuān)利]甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體均相發(fā)光免疫分析試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210235362.X
• 申請(qǐng)日: 2012-07-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102735833A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李會(huì)強(qiáng);孫穎;張明華;王高升;單立新;苑鳳君;薛寒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 沃克（天津）生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 天津市宗欣專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

1.一種甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體均相發(fā)光免疫分析試劑盒，包括均相發(fā)光96孔測(cè)定板，甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體標(biāo)準(zhǔn)品，鏈霉親和素包被供體微球溶液和生物素標(biāo)記甲狀腺過(guò)氧化物酶抗原，其特征在于：該試劑盒還包括甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體包被的受體微球溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體均相發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征在于：甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體包被受體微球溶液是按照以下配比的原料制成的，

a.將欲標(biāo)記的甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體裝入透析袋中，置于0.1M?pH?8.0?磷酸鹽緩沖液透析，去除Tris、甘氨酸等含有氨基的成分，透析后的抗體溶液，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定抗體含量，調(diào)整濃度至1-2毫克/毫升；

b.受體微球加入0.1M?pH?8.0?磷酸鹽緩沖鹽水溶液，離心洗滌1-2次，每次16000×G?15分鐘，吸干上清液,?將微球濃度調(diào)整至10-20毫克/毫升待用；

c.按受體微球:透析后甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體為1:10的質(zhì)量比混合于0.1M?pH?8.0?磷酸鹽緩沖鹽水溶液中，再依次加入體積百分比0.6-0.625%的10%吐溫20溶液、4-5%?新鮮配制的400?mM?氰基硼氫化鈉溶液，充分混勻置37℃溫箱內(nèi)反應(yīng)48小時(shí)以上；

d.用800mM氫氧化鈉溶液配制溶度為65毫克/毫升的羧甲氨基胺溶液，加體積百分比為4-5%的羧甲氨基胺溶液于標(biāo)記后的離心管內(nèi)，置37℃溫箱內(nèi)反應(yīng)1小時(shí)；

e.將離心管置于離心機(jī)內(nèi)，16000×G?離心15分鐘；用移液管吸取上清溶液，再加入100mM?Tris-HCl?pH?8.0溶液，重新懸浮微球；重復(fù)離心，最終調(diào)整濃度至5-10微克/毫升備用；

f.用pH?8.0?0.1?M?Tris-HCl?緩沖液將標(biāo)記后受體微球稀釋至20微克/毫升，制備受體微球溶液。

3.一種甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體均相發(fā)光免疫分析的檢測(cè)方法，其是按以下步驟進(jìn)行的，

a.將分別瓶裝的甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體標(biāo)準(zhǔn)品、鏈霉親和素包被供體微球溶液、生物素標(biāo)記甲狀腺過(guò)氧化物酶抗原和甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體包被的受體微球溶液取出，至室溫平衡20分鐘；并將均相發(fā)光96孔測(cè)定板根據(jù)需要做好標(biāo)記；

b.測(cè)定板微孔內(nèi)依次加入50微升待測(cè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品、25微升生物素標(biāo)記甲狀腺過(guò)氧化物酶抗原、25微升甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體包被的受體微球溶液，混勻后置37℃溫箱或水浴，溫育30分鐘；

c.各孔再加入150微升鏈霉親和標(biāo)記供體微球溶液，混勻后置37℃溫箱或水浴，繼續(xù)溫育20分鐘；

d.應(yīng)用均相發(fā)光免疫分析儀測(cè)定各孔發(fā)光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)采用680納米，檢測(cè)波長(zhǎng)采用615納米；

e.標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定結(jié)果采用四參數(shù)擬合方式繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或獲得數(shù)學(xué)函數(shù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線或數(shù)學(xué)函數(shù)計(jì)算未知樣品甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體濃度。