[發明專利]擴張性心肌病易感性檢測試劑盒（CTLA4等基因）

無效

• 申請號: 201210234541.1
• 申請日: 2012-07-09
• 公開（公告）號: CN103540645A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 鄭俊斌
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種篩查擴張性心肌病高危人群的基因無創檢測試劑盒，其特征在于：檢測?CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A?(rs1800629)、TNF-β基因上A252G?rs909253)的3個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物與DNA測序引物、Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、SAP酶、ExoI酶、BigDye?mix、EDTA溶液、70%乙醇溶液、100%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的特異性引物對是指針對?CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A?(rs1800629)、TNF-β基因上A252G?rs909253)的3個單核苷酸多態性位點，能特異性擴增出包含這3個SNPs位點的DNA片段的引物對。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的DNA測序引物是針對?CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A?(rs1800629)、TNF-β基因上A252G?rs909253)的3個單核苷酸多態性位點而設計，能通過DNA測序技術特異性檢測出上述3個SNPs位點基因型的DNA測序引物。

4.根據權利要求1所示的試劑盒，其特征在于，所含的3對特異性引物序列如下：

（1）CTLA4（A49G）正向引物：5'CTGAACACCGCTCCCATAAA3'

CTLA4（A49G）反向引物：5'?GAATACAGAGCCAGCCAAGC3'

（2）TNF-α（G-308A）正向引物：5'GGAAGCCAAGACTGAAACCA3'

TNF-α（G-308A）反向引物：5'TCATCTGGAGGAAGCGGTAG3'

（3）TNF-β?(A252G)?正向引物：5'CAGAAGGAGGAGGTGTAGGGT3'

?????TNF-β?(A252G)?反向引物：5'TTCGTGCTTTGGACTACCG3'。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所含的3條DNA測序引物序列如下：

（1）CTLA4（A49G）測序引物：5'CTGAACACCGCTCCCATAAA3'

（2）TNF-α（G-308A）測序引物：5'GGAAGCCAAGACTGAAACCA3'

（3）TNF-β?(A252G)?測序引物：5'?CAGAAGGAGGAGGTGTAGGGT3'。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括：

（1）PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液2.5ul，25mM?dNTP混合液0.2ul，5U／ul?Taq?DNA聚合酶?0.125ul，20uM特異性引物對，每條引物各0.25ul，ddH₂O?19.175ul；

（2）PCR產物純化體系：1?U／ul?SAP酶0.75ul，10?U／ul?ExoI酶0.375ul，ddH₂O?3.875ul；

（3）測序反應體系：25%?BigDye?mix1ul，3.2uM?DNA測序引物1ul，125mM?EDTA溶液1ul，100%乙醇溶液15ul，70%乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O?2ul。

7.本試劑盒供一人份檢測應用，試劑盒的保存溫度為-20℃。