[發明專利]一種奈西利肽粗品的固相制備方法

有效

• 申請號: 201210234405.2
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN102702342A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 白俊才;張國慶;張若平;方路
• 申請（專利權）人: 上海昂博生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

技術領域

本發明涉及醫藥多肽類原料藥的化學合成，尤其涉及一種奈西利肽粗品的固相制備方法。

背景技術

奈西利肽(（nesiritide/Natrecor）是一類新的血管擴張劑，由32個氨基酸組成的環肽，10-26位置通過S-S鍵相連。在急性心力衰竭的治療中一種重組人腦鈉肽或B型利鈉肽（BNP），與內生荷爾蒙完全相同，主要用于急性失代償性充血性心力衰竭時呼吸困難的治療。奈西利肽有靜脈、動脈和冠狀血管舒張作用以減輕前后負荷并在無直接正性肌力作用的情況下增加心輸出量。在慢性心力衰竭的患者中靜注奈西利肽可通過促進鈉外排和抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統和交感神經系統而產生有益的血液動力學作用。奈西利肽與靜脈注射硝酸甘油比較可更有效地改善血液動力學并具有較少不良反應。

目前奈西利肽的合成方法有固相法、基因重組等方法，如申請號200910104860所述的制備方法以HMPB-AM樹脂為起始原料，在縮合劑、接肽試劑的作用下，通過固相合成法依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸，得到側鏈全保護線性奈西利肽HMPB-AM樹脂。CN200410083873.X報道了一種固相制備奈西利肽的方法。然而現有技術中提供的這些方法HMPB-AM樹脂不是常規樹脂，較難在市場上獲得。HMPB-AM樹脂在連接Fmoc-His(Trt)-OH時容易引起消旋，雜質較多。

因此，本領域迫切需要提供一種有效、簡便的固相合成奈西利肽粗品的制備方法。

發明內容

本發明旨在提供一種固相合成奈西利肽粗品的制備方法。

本發明提供了一種奈西利肽粗品的固相制備方法，所述方法包括步驟：

以固相合成樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸，獲得保護的三十二肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團，用TBTU/HOBt（即TBTU和HOBt，）、HBTU/HOBt（即HBTU和HOBt）、BOP/HOBt（即BOP和HOBt）、TBTU/HOAt（即TBTU和HOAt）、HBTU/HOAt（即HBTU和HOAt）、DIC/HOBt（即DIC和HOBt）或BOP/HOAt（即BOP和HOAt）中的任何一對為縮合劑，進行接肽反應，得保護的三十二肽樹脂后，同步進行脫側鏈保護基團及切肽，獲得奈西利肽粗品，所述步驟有下述特點：

一是所述固相合成樹脂是溴化王樹脂；及

一是采用DMF/DCM混合溶劑為活化溶劑，預先溶解具有Fmoc保護基團的氨基酸和縮合劑，反應體系外進行活化，再加入到反應體系中。

本發明提供的奈西利肽粗品的固相制備方法中，依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸包括如下步驟：

(a)將王樹脂、PBr3、Fmoc-His(Trt)-OH和DIPEA混合，反應得到溴化王樹脂；

(b)在溴化王樹脂中，加入脫保護劑進行處理，然后樹脂用DMF洗滌，加入用DMF/DCM混合溶劑溶解的具有Fmoc保護基團的氨基酸、縮合劑的混合物，接肽反應后再加入脫保護劑處理，再加入用DMF/DCM混合溶劑溶解的具有Fmoc保護基團的氨基酸，如此重復，獲得Fmoc-Ser¹-Pro²-Lys³-Met⁴-Val⁵-Gln⁶-Gly⁷-Ser⁸-Gly⁹-Cys¹⁰-Phe¹¹-Gly¹²-Arg¹³-Lys¹⁴-Met¹⁵-Asp¹⁶-Arg¹⁷-Ile¹⁸-Ser¹⁹-Ser²⁰-Ser²¹-Ser²²-Gly²³-Leu²⁴-Gly²⁵-Cys²⁶-Lys²⁷-Val²⁸-Leu²⁹-Arg³⁰-Arg³¹-His³²-樹脂；

所說的具有Fmoc保護基團的氨基酸，依次為：

(1)Fmoc-His(Trt)-OH或Fmoc-His-OH、