[發明專利]一種透明質酸菌種復壯新方法

有效

• 申請號: 201210233180.9
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN102703322A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 歐韋福;劉樹新;黃云兵
• 申請（專利權）人: 柳州市柳化集團大力透明質酸有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 柳州市榮久專利商標事務所(普通合伙) 45113
• 代理人: 韋微

技術領域

本發明涉及一種菌種復壯的方法，特別涉及一種透明質酸菌種復壯新方法。

背景技術

在實際生產或實驗室中保存的透明質酸菌種經常會發生退化現象，因此，需要不斷進行復壯，以得到性能優良的菌種，常規的復壯方法是利用常規或加富培養基平板，進行劃線分離方法，利用淘汰方法將菌種進行分離，從中選擇出性能良好的菌種而得到復壯，但是這種方法較保守，復壯成功率非常低，而且復壯得到的菌種不夠好，容易退化。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種復壯劑原料易得，制作和使用過程簡單，提高了菌種的復壯率和產酸率的透明質酸菌種復壯新方法，解決了上述現有技術中存在的問題。

解決上述技術問題的技術方案是：一種透明質酸菌種復壯新方法，包括以下步驟：

（1）復壯劑的制備：

a1、先取土豆切碎成粒度小于5mm的顆粒狀，然后將土豆和玉米按重量比為3-4：1混合絞碎得到復壯劑原料，再按1g復壯劑原料加入1.8-2.2mL水計向復壯劑原料中加入水，得到混合物；

b1、將步驟a1得到的混合物加熱至沸騰，然后繼續加熱使混合物保持沸騰2.5-3.5小時，并蒸發掉混合物體積50%-70%的水，加熱過程每間隔20-30分鐘對物料進行攪拌防止發焦；

c1、在無菌操作臺上用滅菌的濾布過濾得到浸提液，冷卻到常溫備用；?

d1、按羊血與浸提液體積比為2：7-8計把無菌脫纖維綿羊血加入到浸提液中，混合均勻制得復壯劑，放入2℃-6℃的冰箱內保存；

（2）透明質酸菌種復壯：

a2、配制透明質酸固體培養基，高溫滅菌后冷卻至50℃-60℃；

b2、在無菌操作臺上將固體培養基體積12-16%的復壯劑加入到固體培養基中，搖勻后再倒到平板中冷卻到室溫，得到復壯平板；

c2、把退化的透明質酸菌種斜面或甘油管取出活化25-35分鐘，然后用接種環挑出退化菌種在復壯平板上劃線；

d2、把劃好線的復壯平板放在培養箱中培養30-40小時，直到菌種在平板上出現透明質酸單菌落，再用接種環挑出單菌落進行斜面培養，培養好后得到復壯好的菌種放入冰箱進行保存。

步驟a2所述的固體培養基和步驟d2所述的斜面培養采用的培養基的配制如下：先分別稱取腦心浸粉37克、酵母粉10克、葡萄糖1克、七水硫酸鎂2克，然后一起溶解于1000mL水中，溶解完全后調節液體pH值到7.2，最后將25克瓊脂剪碎放入配制得到。

步驟a2所述的高溫滅菌是在121℃高溫條件下滅菌30分鐘，步驟d2所述的把劃好線的復壯平板放在35℃-40℃培養箱中培養，所述的復壯好的菌種放入2℃-6℃冰箱進行保存。

本發明之一種透明質酸菌種復壯新方法具有以下有益效果。

1.本發明復壯劑原料易得，制作和使用過程簡單：本發明的復壯劑利用常見的動物材料（羊血）和植物材料（土豆和玉米）通過簡單的粉碎、蒸發浸提、混合等步驟處理后制得復壯劑，復壯劑與透明質酸固體培養基按一定比例混合后即可用于透明質酸菌種的復壯。

2.提高了菌種的復壯率和產酸率：使用該方法使透明質酸菌種的復壯機率提高10倍以上，即可使每個平板得到的優良菌種個數由原來的1-3個提高到30-40個，而且得到的菌種性能良好，產酸率提高30%左右。

下面，結合實施例對本發明之透明質酸菌種復壯新方法的技術特征作進一步的說明。

具體實施方式

實施例1：

一種透明質酸菌種復壯新方法，包括以下步驟：

（1）復壯劑的制備：

a1、先取150克新鮮土豆切碎成粒度小于5mm的顆粒狀，然后將土豆和50克新鮮土豆一起放入豆漿機中絞碎，再加入到裝有400毫升水的1800mL燒杯中混合均勻；

b1、將上述混合物加熱，加熱到水小開沸騰，保持物料上下翻滾，燒杯上加蓋玻璃片以防水過分蒸發，加熱保持沸騰的時間為3小時左右，每間隔20分鐘對物料進行攪拌防止發焦，將水蒸發掉50%-70%（體積比），得到300-400mL混合液；

c1、在無菌操作臺上以無菌操作方式用滅菌的濾布過濾出120mL浸提液，冷卻到常溫備用；

d1、在無菌操作臺上把30mL無菌脫纖維綿羊血加入到上述120mL浸提液中，混合搖勻而制得150mL復壯劑，放入2℃-6℃的冰箱內保存。

（2）透明質酸菌種復壯：

a2、配制透明質酸固體培養200ml，121℃高溫滅菌30分鐘，冷卻到60℃；