[發(fā)明專利]一種透明質(zhì)酸菌種復(fù)壯新方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210233180.9 | 申請日: | 2012-07-06 |
| 公開(公告)號: | CN102703322A | 公開(公告)日: | 2012-10-03 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 歐韋福;劉樹新;黃云兵 | 申請(專利權(quán))人: | 柳州市柳化集團(tuán)大力透明質(zhì)酸有限公司 |
| 主分類號: | C12N1/00 | 分類號: | C12N1/00 |
| 代理公司: | 柳州市榮久專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 45113 | 代理人: | 韋微 |
| 地址: | 545002 廣*** | 國省代碼: | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 透明 菌種 復(fù)壯 新方法 | ||
1.一種透明質(zhì)酸菌種復(fù)壯新方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)復(fù)壯劑的制備:
a1、先取土豆切碎成粒度小于5mm的顆粒狀,然后將土豆和玉米按重量比為3-4:1混合絞碎得到復(fù)壯劑原料,再按1g復(fù)壯劑原料加入1.8-2.2mL水計向復(fù)壯劑原料中加入水,得到混合物;
b1、將步驟a1得到的混合物加熱至沸騰,然后繼續(xù)加熱使混合物保持沸騰2.5-3.5小時,并蒸發(fā)掉混合物體積50%-70%的水,加熱過程每間隔20-30分鐘對物料進(jìn)行攪拌防止發(fā)焦;
c1、在無菌操作臺上用滅菌的濾布過濾得到浸提液,冷卻到常溫備用;?
d1、按羊血與浸提液體積比為2:7-8計把無菌脫纖維綿羊血加入到浸提液中,混合均勻制得復(fù)壯劑,放入2℃-6℃的冰箱內(nèi)保存;
(2)透明質(zhì)酸菌種復(fù)壯:
a2、配制透明質(zhì)酸固體培養(yǎng)基,高溫滅菌后冷卻至50℃-60℃;
b2、在無菌操作臺上將固體培養(yǎng)基體積12-16%的復(fù)壯劑加入到固體培養(yǎng)基中,搖勻后再倒到平板中冷卻到室溫,得到復(fù)壯平板;
c2、把退化的透明質(zhì)酸菌種斜面或甘油管取出活化25-35分鐘,然后用接種環(huán)挑出退化菌種在復(fù)壯平板上劃線;
d2、把劃好線的復(fù)壯平板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30-40小時,直到菌種在平板上出現(xiàn)透明質(zhì)酸單菌落,再用接種環(huán)挑出單菌落進(jìn)行斜面培養(yǎng),培養(yǎng)好后得到復(fù)壯好的菌種放入冰箱進(jìn)行保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種透明質(zhì)酸菌種復(fù)壯新方法,其特征在于:步驟a2所述的固體培養(yǎng)基和步驟d2所述的斜面培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基配制如下:先分別稱取腦心浸粉37克、酵母粉10克、葡萄糖1克、七水硫酸鎂2克,然后一起溶解于1000mL水中,溶解完全后調(diào)節(jié)液體pH值到7.2,最后將25克瓊脂剪碎放入配制得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種透明質(zhì)酸菌種復(fù)壯新方法,其特征在于:步驟a2所述的高溫滅菌是在121℃高溫條件下滅菌30分鐘,步驟d2所述的把劃好線的復(fù)壯平板放在35℃-40℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),所述的復(fù)壯好的菌種放入2℃-6℃冰箱進(jìn)行保存。
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