[發明專利]焦磷酸測序法檢測抗葉酸類制劑個體化用藥基因多態性的試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201210230457.2
• 申請日: 2012-07-05
• 公開（公告）號: CN102796814A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 周宏灝
• 申請（專利權）人: 周宏灝
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

1.一種焦磷酸測序法檢測抗葉酸類制劑個體化用藥基因多態性的試劑盒，其特征在于，包括如下引物：

（1）擴增引物：

?????上游引物：5’-GGT?GTC?AAA?GTG?TCA?CTG?AAC?TA-3’；

??????????5’-?AAG?GCC?ACC?CCG?AAG?CAG?GGA?GCT?-3’，該引物5’標記生物素；

??下游引物：5’-CTC?TTG?TTT?TAG?ATG?TTA?AAT?CAC-3’，該引物5’標記生物素；

???????????????5’-?GGG?GAC?GAT?GGG?GCA?AGT?-3’；

（2）測序引物：5’-?GCT?GAC?TTT?CCA?GAC?AAC?-3’；

???????????????5’-?CGT?GAT?GAT?GAA?ATC?G?-3’。

2.一種應用權利要求1所述的試劑盒檢測抗葉酸類制劑個體化用藥基因多態性的方法，包括如下步驟：

（1）DNA提??；

（2）聚合酶鏈反應：

配制50μl?PCR擴增體系，包含：10×PCR?buffer?10.0μl，?dNTP?2.0μl，上游引物?1.0μl，?下游引物1.0μl，?rTaq1.0μl，水31.0μl，模板4.0μl；循環程序為：95℃5min預變性；依次在95^oC?30S，52^oC?30S，72^oC?30S，進行38個循環；?72^oC?保持5min，最終保持在4℃，得擴增產物；

（3）焦磷酸測序單鏈樣本純化；

（4）焦磷酸測序及結果分析。