[發(fā)明專利]一種雷公藤有效成分的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210230388.5
• 申請(qǐng)日: 2012-07-05
• 公開（公告）號(hào): CN103524591A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋萬(wàn)興;肖世基;劉力恒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07J63/00
• 分類號(hào): C07J63/00;C07J73/00
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化工產(chǎn)品的分離方法，具體是分離雷公藤中有效成分的方法。

技術(shù)背景

衛(wèi)矛科雷公藤屬植物在我國(guó)就有10個(gè)種，而用于藥用的主要有3種：即雷公藤、昆明山海棠(又稱粉背雷公藤)和東北雷公藤(又稱黑蔓)。雷公藤又稱水莽草、黃藥、黃藤、菜蟲藥、斷腸草[全國(guó)高等植物圖鑒，第二冊(cè)，科學(xué)出版社，1982，2686]。雷公藤具有多種藥理作用，如：清熱解毒、祛風(fēng)除濕、舒筋活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲止癢；已用于多種疾病的治療，如：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、某些皮膚病、腎炎、肝炎，有一定的抗腫瘤和抗生育作用，還具有潛在的抗HIV活性[Hongquan?Huan?et?al.Sesquiterpene?alkaloids?from?Tripterygium?hypoglaucum?and?Tripterygium?wilfordii：a?new?class?of?potent?anti-HIV?agent.Journal?of?Natural?products.2000，63(3)：357-361]。因此，雷公藤中有效成分分離提純技術(shù)的研究對(duì)未來新藥的研發(fā)具有深遠(yuǎn)的影響。

目前國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道的對(duì)雷公藤的有效成分分離純化方法主要有：醇提水沉法、水提醇沉法、醇提有機(jī)溶劑萃取法[陳俊元等，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1989，5，195-200]。通過比較研究得出的初步結(jié)論是，水提醇沉法與醇提水沉法相比提取率相近但是降低了成本，醇提有機(jī)溶劑萃取法和前兩種工藝相比萃取率最好，但是直接用有機(jī)溶劑萃取乳化嚴(yán)重，處理麻煩，難以進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)[李漢堡等，中成藥，1991，10，1-4]。上述三種方法都存在如下問題：工藝復(fù)雜、物耗過大、收得率低，而且大量使用有毒有害的試劑，如氯仿、乙醚、丙酮等。曾有利用磷酸二氫鈉水溶液與乙醇形成雙水相，然后用水不溶性溶劑進(jìn)行三相萃取富集雷公藤有效成分[肖世基等，廣西大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，3，496-499]。但所用無機(jī)鹽的回收比較麻煩。而采用聚合物-無機(jī)鹽水溶液-乙醇-有機(jī)溶劑三相萃取法則可以降低無機(jī)鹽用量，同時(shí)聚合物可以通過超濾膜過濾回收，且聚合物與浸膏中的成分存在一定的相互作用，使得萃取可以以一定的選擇性進(jìn)行。其工藝是將雷公藤根干粉用醇提取，得到提取液，濃縮后得浸膏。將浸膏分散于聚合物-無機(jī)鹽水溶液-乙醇-水不溶性有機(jī)溶劑三相系統(tǒng)中，進(jìn)行選擇性萃取，分離出上層有機(jī)相，濃縮有機(jī)相得到有效部位，然后將得到的有效部位用醇溶解加水分步結(jié)晶除去大部分非有效物質(zhì)得有效成分部位。有效成分部位用高速逆流色譜分離得到雷公藤紅素，用硅膠柱層析分離得到雷公藤甲素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是將雷公藤醇提物用三相萃取分離方法得到雷公藤的有效部位，萃取充分且不產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，縮短分離時(shí)間。然后用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑溶解除去不溶物，再分步結(jié)晶除去非有效成分。最后將富集得到的雷公藤有效部位用高速逆流色譜進(jìn)行分離，得到純度95％的雷公藤紅素(tripterine)，用硅膠柱層析分離得到98％的雷公藤甲素(triptolide)。

本發(fā)明分離純化包括以下方法步驟：

1.雷公藤粗提取物的制備：將雷公藤根粉碎，以2～10倍(w/w)雷公藤干重的醇回流提取1～5次，每次2～5小時(shí)，提取液減壓濃縮成浸膏；

2.將上述制得的浸膏溶解分配在0.5-5％?PEG-20000、5％～30％硫酸銨水溶液-乙醇雙水相體系(PEG-20000-硫酸銨水溶液與乙醇形成等體積的兩相體系)中，用石油醚(沸程60-90℃，下同)萃取1～5次，分出石油醚層，濃縮回收。石油醚萃取后余下的雙水相再用乙酸乙酯-石油醚混合溶劑(乙酸乙酯體積含量10％～50％)萃取2～10次，萃取液濃縮得浸膏，回收萃取劑可反復(fù)使用；

3.將步驟2所得的乙酸乙酯-石油醚萃取浸膏溶于2～10倍質(zhì)量的乙醇中，過濾除去不溶物，濾液加水沉淀，低溫靜置24小時(shí)，然后過濾，濾液濃縮得到浸膏；

4.將步驟3所得浸膏經(jīng)高速逆流色譜分離得到高純度的雷公藤紅素。色譜條件：正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水按體積比為1～4∶2～5∶2～5∶1～4充分混合，靜置分為兩相，分出兩相。輕相為固定性，重相為流動(dòng)相。將步驟3所得浸膏溶解在輕相中，形成0.5-10％的溶液。溫度20～40℃，主機(jī)轉(zhuǎn)速600～1000r/min，流動(dòng)相流速1.0～5.0ml/min。紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)λ＝425nm。組分峰對(duì)應(yīng)流出液經(jīng)過濃縮，得到雷公藤紅素。