[發(fā)明專(zhuān)利]天山凍土中產(chǎn)低溫中性蛋白酶菌株篩選及培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210228732.7
• 申請(qǐng)日: 2012-07-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102864099A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊瑞金;祁丹丹;趙偉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12N1/02;C12N9/52;C12R1/38
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.天山凍土中產(chǎn)低溫中性蛋白酶菌株篩選方法，包括以下步驟：

(1)初篩：吸取富集后的培養(yǎng)液用倍比稀釋法制不同的稀釋度移入初篩平板中，涂勻，15℃培養(yǎng)。待菌落長(zhǎng)好后，挑選透明圈較大菌株，斜面保存。

(2)復(fù)篩：以40℃為上限生長(zhǎng)溫度，即在該溫度不生長(zhǎng)的菌株為耐冷菌。將初篩得到的產(chǎn)蛋白酶菌株在初篩平板上點(diǎn)樣，在40℃不生長(zhǎng)的菌株，為試驗(yàn)菌株。以酪蛋白為底物，采用福林(Folin)試劑顯色法測(cè)定酶活，進(jìn)一步篩選出產(chǎn)酶能力強(qiáng)的菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種Pseudomonas?sp.N-8，具有以下特征：

(1)生長(zhǎng)特征：該菌株最適生長(zhǎng)溫度為20℃；最適生長(zhǎng)pH為7.0；

(2)菌體特征：革蘭氏陰性菌，菌體呈桿狀，細(xì)胞單個(gè)，大小為(0.5-0.8)×(2.0-3.2)μm，有莢膜，有鞭毛；

(3)菌落特征：在酪蛋白平板上，菌落呈圓形，乳白色，不透明，表面光滑，邊緣整齊，易挑取，產(chǎn)生明顯的透明圈；

(4)生理生化特征：該菌株接觸酶、精氨酸雙水解酶、硝酸鹽(還原)反應(yīng)為陽(yáng)性，能水解明膠，硫化氫試驗(yàn)、伏一普二氏試驗(yàn)(VP)、甲基紅試驗(yàn)(MR)為陰性，不能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、纖維二糖、鼠李糖、棉子糖。

3.一種利用Pseudomonas?sp.N-8產(chǎn)低溫中性蛋白酶發(fā)酵條件的優(yōu)化：

(1)通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，最佳培養(yǎng)基配方為(g/L)：葡萄糖10，酵母粉8，酪蛋白20，K⁺0.4；

(2)通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，最佳培養(yǎng)條件為：種齡24h，起始pH7，接種量4％，裝液量50mL/250mL。