[發(fā)明專利]重組促紅細(xì)胞生成素及制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210228393.2 | 申請日： | 2010-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN102838677A | 公開（公告）日： | 2012-12-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 萬為 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州元基生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C07K17/08 | 分類號： | C07K17/08;C12N15/85;A61K38/18;A61K47/48;A61P7/06 |
| 代理公司： | 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103 | 代理人： | 孫仿衛(wèi);趙艷 |
| 地址： | 215211 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 重組 紅細(xì)胞 生成 制備 方法 | ||
1.一種化學(xué)修飾的重組促紅細(xì)胞生成素，其中，第152位的氨基酸殘基為2-氨-8-氧代壬酰殘基，所述的2-氨-8-氧代壬酰殘基是通過在促紅細(xì)胞生成素基因序列的第152位發(fā)生琥珀無義突變后由該琥珀無義突變的位置翻譯而成的，在第152位發(fā)生琥珀無義突變的促紅細(xì)胞生成素基因序列如SEQ?ID?No.4所述，所述的2-氨-8-氧代壬酰殘基上共價連接了聚乙二醇。
2.如權(quán)利要求1所述的重組促紅細(xì)胞生成素，其中，所述的聚乙二醇為羥氨基或聯(lián)氨基取代的聚乙二醇。
3.制備如權(quán)利要求1所述的重組促紅細(xì)胞生成素的方法，其中，該方法包括
(1)構(gòu)建含有編碼2-氨-8-氧代壬酰-tRNA合成酶基因、琥珀突變抑制tRNA基因、在第152位發(fā)生琥珀無義突變的促紅細(xì)胞生成素基因的重組表達(dá)載體，所述編碼2-氨-8-氧代壬酰-tRNA合成酶基因序列如SEQ?ID?No.6所述，所述琥珀突變抑制tRNA基因序列如SEQ?IDNo.5所述，所述在第152位發(fā)生琥珀無義突變的促紅細(xì)胞生成素基因序列如SEQ?ID?No.4所述；
(2)將所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞并從中分離得到在第152位具有2-氨-8-氧代壬酰殘基的重組促紅細(xì)胞生成素；
(3)采用聚乙二醇對分離得到的所述重組促紅細(xì)胞生成素上的2-氨-8-氧代壬酰殘基進(jìn)行化學(xué)修飾。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述重組表達(dá)載體為
重組質(zhì)粒pcDNA3-1-pylT-KeoKRS-EPOTAG。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述宿主細(xì)胞為將含有編碼2-氨-8-氧代壬酰-tRNA合成酶基因、琥珀突變抑制tRNA基因、在第152位發(fā)生琥珀無義突變的促紅細(xì)胞生成素基因的重組表達(dá)載體穩(wěn)定整合到CHO細(xì)胞染色體的CHO細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求1所述的化學(xué)修飾的重組促紅細(xì)胞生成素在制備治療貧血藥物中的應(yīng)用。
7.一種治療貧血的藥物組合物，其中，該組合物包含權(quán)利要求1所述的化學(xué)修飾的重組促紅細(xì)胞生成素和藥學(xué)上可以接受的載體。
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