[發(fā)明專利]一種茶樹組培再生體系建立的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210227942.4
• 申請日: 2012-07-04
• 公開（公告）號: CN102726296A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高麗萍;王婕;劉亞軍;貢年娣
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 合肥金安專利事務(wù)所 34114
• 代理人: 金惠貞

1.一種茶樹組培再生體系建立的方法，其特征在于包括以下操作步驟：

1.1愈傷組織的誘導

采摘9月下旬生理成熟的茶籽作為茶樹再生體系的原材料，即外植體；取茶籽5～10顆，將綠色的外殼剝?nèi)?，用濃?5%的乙醇浸泡30秒，用無菌水洗3～4次；再用濃度0.1%的升汞溶液浸泡10分鐘，用無菌水洗3～4次；在超凈條件下剝?nèi)シN皮，選取完整的、帶有胚的剝?nèi)シN皮的茶樹籽接種于普通B₅培養(yǎng)基上，接種量為每40毫升接3～4顆；培養(yǎng)2周，有茶樹愈傷組織長出；所述普通B₅培養(yǎng)基中加入了二氯苯氧基乙酸和6-糠氨基嘌呤，其中二氯苯氧基乙酸的加入量為2.5mg/L，6-糠氨基嘌呤的加入量為0.5mg/L；

1.2愈傷組織的繼代和增殖

將茶樹愈傷組織切下，并切成直徑6～10毫米愈傷組織塊，培養(yǎng)于普通B₅培養(yǎng)基上，接種量每40毫升接5～10塊；培養(yǎng)條件為黑暗、溫度為25～28度；每21天更換一次新鮮的普通B₅培養(yǎng)基；培養(yǎng)3周，得到鮮重可以增殖為原來的1.8～2.2倍的增殖愈傷組織；在此條件下，該愈傷組織可以穩(wěn)定繼代4年；

1.3不定芽的誘導，

將增殖愈傷組織接種到不定芽誘導培養(yǎng)基上，接種量每40毫升接直徑6～10毫米大小的愈傷組織5～10塊；培養(yǎng)條件為12小時光照和12小時黑暗交替，溫度為25～28度，光強為3000～6000勒克司；每4周更換一次不定芽誘導培養(yǎng)基；培養(yǎng)到第3周，有部分愈傷組織轉(zhuǎn)綠；培養(yǎng)到第4周，不定芽的誘導率為15.71%，培養(yǎng)到2個月，誘導率上升為24.29%，培養(yǎng)到4個月，誘導率高達65.71%；所述不定芽誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入吲哚丁酸和6-芐基腺嘌呤，其中吲哚丁酸的加入量為0.1mg/L，6-芐基腺嘌呤的加入量為2.5mg/L；

1.4不定芽的增殖

將新誘導出的不定芽切下，栽插到不定芽增殖培養(yǎng)基上，栽插量每100毫升接1～3棵；培養(yǎng)條件為12小時光照和12小時黑暗交替，溫度為27度，光強為4000勒克司；培養(yǎng)3周，大量的叢生芽長出；在此條件下，可以不斷增殖不定芽；所述不定芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入吲哚丁酸和苯基噻二唑基脲，其中吲哚丁酸的加入量為?0.1mg/L、苯基噻二唑基脲的加入量為0.015mg/L；

1.5壯苗

將叢生芽切下，栽插到壯苗培養(yǎng)基上，栽插量每100毫升接1～3棵；?培養(yǎng)條件為12小時光照和12小時黑暗交替，溫度為27度，光強為4000勒克司；培養(yǎng)3周，叢生芽平均可生長2～3厘米，得到茶苗；所述壯苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入吲哚丁酸，吲哚丁酸的加入量為0.3mg/L；

1.6生根和移栽

選取苗高達5厘米以上的粗壯無根的茶苗，直接栽入生根土壤中，培養(yǎng)條件為12小時光照和12小時黑暗交替，溫度為25度，光強為3000～6000勒克司；移栽初期，每日三次進行葉面噴水；培養(yǎng)8周，存活率為41.64%，所有存活的茶苗均生根，所述生根土壤配方為丹麥品氏托普泥炭土：蛭石按質(zhì)量比1：1均勻混合。