[發(fā)明專利]胞壁酰二肽-抗CD20免疫偶聯(lián)物制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210227888.3
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN103087196A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫立榮;王玲珍
• 申請（專利權(quán)）人: 孫立榮;王玲珍
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/28;C07K5/072;A61K47/48;A61K38/05;A61P35/02;A61P35/00;A61P37/02;A61P19/04;A61P19/02;A61P29/00
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1.一種胞壁酰二肽(MDP)-抗CD20(Rituximab)免疫偶聯(lián)物，其特征在于其為式I所示的化合物或其鹽，其中為抗CD20單克隆抗體，n₃為1、2、3、4、或5，n₄為0、1、2、3、4、或5，n₁為1、2、3、4、5或6。

式I。

2.如權(quán)利要求1所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物，其特征在于n₃＝3，n₄＝2，n₁＝3。

3.一種藥物組合物，其中包含權(quán)利要求1或2所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物和可藥用的載體。

4.一種藥物制劑，其特征包含權(quán)利要求1或2所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物和可藥用的載體。

5.如權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于制劑形式為：片劑、膠囊劑、緩釋劑、注射劑、液體制劑、顆粒劑、丸劑。

6.權(quán)利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物在制備治療惡性淋巴瘤中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物在制備治療表達(dá)CD20的腫瘤藥物中得應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7中所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤，具體為：白血病及乳腺癌、前列腺癌。

9.權(quán)利要求1或2中所述的MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物在制備治療由B淋巴細(xì)胞活化介導(dǎo)的自身免疫疾病藥物中得應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于自身免疫性疾病為：系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或特發(fā)性血小板減少性紫癜。

11.一種制備權(quán)利要求1或2中MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物的方法，其特征在于：

化合物1的制備

連接臂中碳原子可為1～6，本研究以三個碳原子的連接臂為例，氬氣保護(hù)下，在燒瓶中，加入Boc保護(hù)的連接臂N-Boc-1，3-丙二胺鹽酸鹽20mg，用3ml二甲基甲酰胺溶解，加入過量的三乙胺，然后加入N-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶硫基)丙酸酯，室溫攪拌反應(yīng)1h，點板檢測反應(yīng)結(jié)束，后經(jīng)過硅膠柱分離，真空蒸干，得產(chǎn)物化合物1；

化合物2的制備

氬氣保護(hù)下，在反應(yīng)瓶中，加入化合物110mg，加入1.5ml二氯甲烷，冰浴下攪拌10min，緩慢加入1.5ml三氟乙酸，冰浴條件下攪拌反應(yīng)20min，點板檢測反應(yīng)結(jié)束，減壓濃縮蒸干，并加入適量純甲醇，再次蒸干，得到化合物2；

化合物3的制備

氬氣保護(hù)下，在10ml反應(yīng)瓶中，加入胞壁酰二肽5mg、化合物23mg，用2ml二甲基甲酰胺和四氫呋喃溶解，冰浴條件下加入1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑1.66mg及N-(3-二甲基氨基丙基)-N’乙基-碳二亞胺2.34mg，攪拌15min，恢復(fù)至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2～3h，點板檢測反應(yīng)完全，經(jīng)硅膠柱，分離得化合物3，真空蒸干，得化合物3；

化合物4的制備

氬氣保護(hù)下，在反應(yīng)瓶中，加入鼠抗人CD20單克隆抗體(Rituximab)100mg，用含有2mmol/LEDTA、PH為8、濃度為0.1mol/L的PBS溶液，溶解調(diào)整濃度為8mg/ml，然后加入2-亞氨基四氫噻吩1.38mg，攪拌且室溫反應(yīng)1h，經(jīng)Sephacryl?S-100丙烯葡聚糖凝膠柱分離純化，得到化合物4；

MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物的制備

氬氣條件下，在反應(yīng)瓶中，加入化合物467mg，用2ml濃度為0.1mmol/L、PH＝8的PBS溶液溶解，然后加入化合物31.5mg攪拌，4℃下反應(yīng)18-24h，點板檢測反應(yīng)完全，經(jīng)Sephacryl?S-100丙烯葡聚糖凝膠柱分離純化，得到MDP-抗CD20免疫偶聯(lián)物。

12.一種抗CD20單克隆抗體衍生物，其特征在于為式II所示化合物，其中為抗CD20單克隆抗體，n₂為5，

式II。

13.一種胞壁酰二肽MDP的衍生物，其特征在于為式III所示化合物，n₁為1、2、3、4、5或6，

式III。