[發(fā)明專利]2型糖尿病易感基因位點(diǎn)及檢測方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210226735.7
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN103525899A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林旭;黎懷星;甘蔚;王一欽;魯玲
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;崔佳佳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地涉及GRK5基因和RASGRP1基因的單核苷酸多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphism,SNP)及其與2型糖尿病的相關(guān)性。本發(fā)明還涉及檢測這些SNP的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

糖尿病是一組以糖代謝異常為特征的由不同病理生理改變組成的綜合征，不同患者之間具有較大的異質(zhì)性，而其主要的兩種病理生理改變?yōu)橐葝u素分泌不足和胰島素抵抗。

現(xiàn)在約有九千兩百萬成年人患有2型糖尿病。雖然營養(yǎng)狀況和生活方式的改變、肥胖發(fā)病率的增加等是導(dǎo)致2型糖尿病發(fā)病率增加的重要因素，遺傳因素同樣有著不可或缺的作用。在過去幾十年里，中國的2型糖尿病發(fā)病率顯著升高。研究表明，包括中國漢族人群在內(nèi)的東亞人群，其2型糖尿病的遺傳易感性高于西方人群。

雖然已開展了一些2型糖尿病相關(guān)基因及多態(tài)性的研究，過去幾年對2型糖尿病的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)位點(diǎn)已經(jīng)有很多重要的研究發(fā)現(xiàn)，但是對于不同種族人群的2型糖尿病發(fā)病的遺傳背景了解尚淺。

近年來，單核苷酸多態(tài)性(SNP)和單倍型(haplotype)在多基因疾病研究中的廣泛運(yùn)用，為在分子水平上研究2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制開辟了全新的思路。同時(shí)，高通量、低成本的SNP檢測手段的不斷出現(xiàn)也為SNP大規(guī)?？焖俜中吞峁┝丝赡堋?!-- SIPO -->

SNP的存在與否以及等位基因頻率存在人種及地域的差異，這就提示多基因疾病遺傳異質(zhì)性的存在，即同一疾病或性狀在不同的人群中可能是不同的遺傳因素造成的。

在歐美人群和部分亞洲人群中開展的2型糖尿病全基因組關(guān)聯(lián)分析研究(GWAS)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)50多個(gè)2型糖尿病易感基因位點(diǎn)。然而這些易感基因的危險(xiǎn)等位基因的效應(yīng)值均很小，其總體效應(yīng)值僅僅解釋2型糖尿病遺傳力的10～15%。

雖然已有許多關(guān)于各種基因多態(tài)性與2型糖尿病的研究，但沒有證實(shí)GRK5基因或RASGRP1基因與2型糖尿病相關(guān)性的報(bào)道，更沒有證實(shí)本發(fā)明所述的GRK5基因或RASGRP1基因SNP與2型糖尿病相關(guān)性的報(bào)道。

綜上所述，鑒于糖尿病嚴(yán)重影響人們身體健康的疾病，為了盡早診斷和治療2型糖尿病，本領(lǐng)域迫切需要尋找2型糖尿病易感基因(尤其是與中國漢族人群相關(guān)的2型糖尿病易感基因位點(diǎn))，并開發(fā)檢測2型糖尿病的方法、試劑盒，或相關(guān)的治療藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種輔助診斷(尤其是早期輔助診斷)2型糖尿病的方法及檢測試劑盒。

本發(fā)明的另一目的是提供一種新的治療2型糖尿病的方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種體外非診斷性檢測樣品是否存在GRK5基因或RASGRP1基因的單核苷酸多態(tài)性的方法，包括步驟：

(a)用特異性引物擴(kuò)增樣品的GRK5基因或RASGRP1基因，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和

(b)檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在選自下組的單核苷酸多態(tài)性：

GRK5基因的rs10886471：即SEQ?ID?NO.:1中第134位C→T;

RASGRP1基因的rs7403531：即SEQ?ID?NO.:2中第164位C→T。

在另一優(yōu)選例中，所述的GRK5基因的rs10886471對應(yīng)于人第10號染色體的第121,139,393位(NCBI36/hg18)。

在另一優(yōu)選例中，所述的RASGRP1基因的rs7403531對應(yīng)于人第15號染色體的36,610,197位(NCBI36/hg18)。

在另一優(yōu)選例中，所述的基因特異性引物具有SEQ?ID?NO:3和4所示序列、或SEQ?ID?NO:5和6所示序列。

在另一優(yōu)選例中，所述的擴(kuò)增產(chǎn)物的長度為100-2000bp且含有SEQ?ID?NO:1中第134位或SEQ?ID?NO:2中第164位。

在本發(fā)明的第二方面,提供了一種檢測2型糖尿病的試劑盒，它包括特異性擴(kuò)增GRK5基因或RASGRP1基因或轉(zhuǎn)錄本的引物，所述的引物擴(kuò)增出長度為100-2000bp且含有SEQ?ID?NO:1中第134位或SEQ?ID?NO:2中第164位的擴(kuò)增產(chǎn)物。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒還含有選自下組的試劑：

(a)與SEQ?ID?NO:1中第134位或SEQ?ID?NO:2中第164位的突變結(jié)合的探針；

(b)識別SEQ?ID?NO:1中第134位或SEQ?ID?NO:2中第164位的突變限制性內(nèi)切酶。