[發明專利]甲型肝炎病毒株HAV-ZL2012，由其制備得到的疫苗及應用

有效

• 申請號: 201210226440.X
• 申請日: 2012-06-29
• 公開（公告）號: CN102757941A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 呂宏亮;張澍
• 申請（專利權）人: 北京健翔和牧生物科技有限公司;山西隆克爾生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/08;A61K39/29;A61P31/14;A61P1/16;G01N33/576;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一種甲型肝炎病毒株，由該病毒株制備得到的疫苗以及應用，特別涉及一種甲型肝炎病毒株HAV-ZL2012，由其制備得到的減毒活疫苗及滅活疫苗，本發明還提供了所述病毒株的減毒適應方法。屬于生物工程領域。

背景技術

甲型病毒性肝炎，簡稱甲型肝炎、甲肝，是由甲型肝炎病毒（Hapatitis?Avirus，HAV）引起的，以肝臟炎癥病變為主的傳染病，主要通過糞-口途徑傳播，臨床上以疲乏，食欲減退，肝腫大，肝功能異常為主要表現，部分病例出現黃疸，主要表現為急性肝炎，無癥狀感染者常見。任何年齡均可患本病，但主要為兒童和青少年。成人甲肝的臨床癥狀一般較兒童為重。冬春季節常是甲肝發病的高峰期。本病病程呈自限性，無慢性化，引起急性重型肝炎者極為少見，隨著滅活疫苗在全世界的使用，甲型肝炎的流行已得到有效的控制。

甲肝疫苗是用于預防甲型肝炎的疫苗，目前在中國已經成為兒童接種的主要疫苗之一，2008年5月被列入擴大免疫疫苗之一。目前，市場上的甲肝疫苗主要有國產甲型肝炎減毒活疫苗和進口的甲型肝炎純化滅活疫苗。甲肝滅活疫苗是世界衛生組織推薦使用的疫苗之一。國產甲肝減毒活疫苗免疫效果好，接種方便，價格也便宜，國產甲肝疫苗只需接種一次；進口甲肝疫苗是死疫苗，則需接種兩次，接種完第一針后相隔6個月后還需接種第二針。接種甲肝疫苗后8周左右便可生產很高的抗體，獲得良好的免疫力?？贵w陽性率可達98%～100%，具有良好的免疫持久性，國產減毒活疫苗免疫力一般可持續5～10年。5～10年后補種一針，可以保持對甲肝病毒的免疫能力，獲得長期的持續保護。進口滅活疫苗免疫力據稱可持續20年及以上。

對甲肝病毒疫苗株的建立和鑒定，促成了甲肝疫苗在世界范圍內的廣泛應用，但是目前的甲肝疫苗存在生產成本高，甲肝病毒的生長周期長，在宿主細胞上無細胞病變等特點，因此使疫苗的生產和質控周期長達半年。為了克服這一缺點，本發明從河北鹽山縣醫院病人糞便中分離到一株甲肝病毒，經二倍體細胞傳代10次，猴腎傳代細胞傳代15次進行病毒富集、然后通過分子克隆技術進行病毒鑒定，得到了一株甲肝病毒株，利用逆向分子生物學技術，對其進行傳統方法的適應和減毒、并快速促成其減毒適應后得到了本發明所述的毒株HAV-ZL2012，經生長性、免疫性、安全性研究，表明本發明的毒株既能用于制備減毒活疫苗，又能用于制備滅活疫苗。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一株經減毒適應后的甲型肝炎病毒株；

本發明的目的之二在于提供所述的甲型肝炎病毒株在制備甲型肝炎疫苗中的應用；及在制備甲肝的診斷試劑中的應用。

本發明的目的之三在于提供由以上所述的甲型肝炎病毒株制備得到的疫苗，所述疫苗包括減毒活疫苗及滅活疫苗。

本發明的目的之四在于提供一種使甲型肝炎病毒株快速減毒適應的方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術特征：

本發明發明人從河北鹽山縣醫院病人糞便中分離得到一株甲肝病毒株，該毒株經二倍體細胞傳代10次，猴腎傳代細胞傳代15次進行病毒富集、然后通過分子克隆技術進行病毒鑒定，從而鑒定并得到了一株甲肝病毒株，利用逆向分子生物學技術，對其進行傳統方法的適應和減毒、并快速促成其減毒適應后得到了本發明所述的毒株HAV-ZL2012，經生長性、免疫性、安全性研究，表明該毒株既能用于制備減毒活疫苗，又能用于制備滅活疫苗。

本發明的一株甲型肝炎病毒株，命名為HAV-ZL2012，經鑒定發現該病毒為一株基因組包含定點突變的無致病性的甲肝病毒株，其在第3839核苷酸位點上的核苷酸由尿嘌呤核苷酸突變為腺嘌呤核苷酸，并且，第5204位點上核苷酸由腺嘌呤核苷酸突變為尿嘌呤核苷酸。（參考毒株為HAJ85-1株,Genebank登號AB27935；IND?HAV-9F株，登錄號FJ360730以及H2疫苗株，AB020564，和HM175疫苗株，M14707。）

本發明的一株甲型肝炎病毒細胞適應株，命名為HAV-ZL2012，其由該病毒株的傳染性克隆感染細胞后產生，所述的該病毒株的傳染性克隆存在于甲肝傳染性克隆工程菌中，所述的甲肝傳染性克隆工程菌，命名為pHAV-ZL2012/DH5α，分類命名為甲肝傳染性克隆工程菌，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院中科院微生物研究所，其菌種保藏編號為：CGMCC?No.6215，保藏日期為2012年6月14日。