[發明專利]利用轉基因植物生產蝦青素的方法

有效

• 申請號: 201210223297.9
• 申請日: 2012-07-02
• 公開（公告）號: CN102888425A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 黃俊潮;鐘玉娟;姜悅
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所;潤科生物工程（福建）有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/66;A01H5/00;C12N1/21;C12N5/10;C07C403/24;A23L1/29;A23K1/14;A61K8/97;A61Q19/08;A61K8/35
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

1.植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT，通過來自衣藻的β-胡蘿卜素加氧酶BKT和來自雨生紅球藻的β-胡蘿卜素羥化酶BHY基因連接到有引導基因產物定位的植物葉綠體信號肽序列，與信號肽序列讀碼框正確接合后插入到植物表達載體pBI121上所獲得。

2.如權利要求1所述的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT，其特征是通過如下方法構建而得：

將番茄核酮糖羧化酶小亞基葉綠體導肽序列LTP插入到含有CRBKT的細菌表達載體pCRBKT得到載體pLTPCRKBT，再將LTP+CRBKT核苷酸片段酶切下來插入到植物表達載體pBI121?上得到表達載體pBI121-LTPCRBKT；

將pBI121-LTPCRBKT用HPBHY替代CRBKT片段得到pBI121-LTPHPBHY，再將該載體上的CaMV35S::SlTpHpBHY::nos序列通過PCR擴增和酶切后插入載體pBI121-LTPCRBKT上的ClaI位點上得到載體pBI121-BHYBKT。

3.應用權利要求1或2所述的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT建立產蝦青素轉基因植物的方法，包括構建含有β-胡蘿卜素加氧酶ＢＫＴ和β-胡蘿卜素羥化酶ＢＨＹ的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT，然后用農桿菌介導的方法得到ＢＫＴ和ＢＨＹ在轉基因植株中表達并催化植物本身的類胡蘿卜素生成蝦青素的轉基因植株步驟。

4.權利要求1所述的基因β-胡蘿卜素加氧酶ＢＫＴ和β-胡蘿卜素羥化酶ＢＨＹ和重組載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT在制備重組宿主細胞中的應用，其特征在于所述的重組宿主細胞是由農桿菌經熱激法獲得所述重組載體所制得。

5.權利要求1所述的基因β-胡蘿卜素加氧酶ＢＫＴ和β-胡蘿卜素羥化酶ＢＨＹ和重組載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT在制備轉基因植物細胞和轉基因植物中的應用，其特征在于所述的轉基因植物細胞和轉基因植物是由農桿菌介導的將權利要求4所述的重組宿主細胞中的重組載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT中的CRBKT或BHYBKT導入到植物細胞，再通過植物組織和器官發生途徑在抗生素卡那霉素選擇壓力下獲得高產蝦青素轉基因植株。

6.權利要求1或2所述的基因β-胡蘿卜素加氧酶ＢＫＴ和β-胡蘿卜素羥化酶ＢＨＹ以及重組載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT在利用轉基因植物生產蝦青素中的應用，包括構建含有β-胡蘿卜素加氧酶ＢＫＴ和β-胡蘿卜素羥化酶ＢＨＹ的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT，然后用農桿菌介導的方法得到轉基因植株，使ＢＫＴ和ＢＨＹ在轉基因植株中表達并催化植物本身的類胡蘿卜素生成蝦青素步驟。

7.用權利要求4所述的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT轉化宿主細胞的方法所制備得到的重組宿主細胞。

8.用權利要求3所述的植物表達載體pBI121-LTPCRBKT和pBI121-BHYBKT轉化宿主細胞，培養轉基因植物的方法所制備獲得的產蝦青素的轉基因植物。

9.權利要求5所述的重組宿主細胞在制備轉基因植物細胞和轉基因植物中的應用。

10.由權利要求3的方法獲取的轉基因植物作為提取蝦青素的原材料。

11.由權利要求3的方法獲取的轉基因植物在制備保健食品中的應用。

12.由權利要求3的方法獲取的轉基因植物在制備化妝品中的應用。

13.由權利要求3的方法獲取的轉基因植物在制備動物養殖品中的應用。