[發明專利]豬瘟、豬偽狂犬病二聯疫苗及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210222016.8
• 申請日: 2012-06-29
• 公開（公告）號: CN103505724A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61P31/14;A61P31/22;A61K39/187;A61K39/245
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種豬瘟、豬偽狂犬病二聯疫苗，其特征在于，所述二聯疫苗包含至少一種豬瘟病毒抗原、至少一種豬偽狂犬病毒抗原。

2.根據權利要求1所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬瘟病毒抗原為豬瘟活病毒、改良/嵌合的豬瘟活病毒、至少含有豬瘟病毒的免疫原性氨基酸序列的重組病毒，至少含有豬瘟病毒的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分的一種或任意幾種的組合。

3.根據權利要求2所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬瘟病毒抗原為豬瘟兔化弱毒株。

4.根據權利要求2所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬瘟病毒抗原為豬瘟病毒E2亞單位抗原。

5.根據權利要求1所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬偽狂犬病毒抗原為豬偽狂犬活病毒、改良/嵌合的豬偽狂犬活病毒，至少含有豬偽狂犬病毒的免疫原性氨基酸序列的重組病毒、豬偽狂犬病毒基因缺失病毒或弱毒病毒的一種或任意幾種的組合。

6.根據權利要求5所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬偽狂犬病毒抗原為偽狂犬病病毒基因缺失SA215株(CCTCC，保藏編號V200002)、Ea株(CGMCC，保藏編號N0.0907)、WKQ-001株(CCTCC，保藏號V200511)或偽狂犬病病毒弱毒株Bartha株、Bartha-K61株、Bucharest株、BUK株、H株(GCMCC，保藏號為No.5013)和C株(CCTCC，保藏編號V201114)的一種或任意幾種的組合。

7.根據權利要求1所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬瘟病毒抗原為豬瘟兔化弱毒株，所述的豬瘟兔化弱毒株的含量為≥3.0×10^3.0TCID₅₀/頭份，優選地為0.6～1.5×10^4.0TCID₅₀/頭份，更優選的為1.0×10^4.0TCID₅₀/頭份。

8.根據權利要求1所述的二聯疫苗，其特征在于，所述的豬偽狂犬病毒抗原為豬偽狂犬病毒基因缺失株(SA215株)，含量為≥5.0×10^5.0TCID₅₀/頭份，優選地為1.0×10^6.0TCID₅₀/頭份。

9.根據權利要求1～8任意一項所述的二聯疫苗，其特征在于，還包括凍干保護劑。

10.一種豬瘟、豬偽狂犬病二聯疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：分別培養豬瘟病毒液和豬偽狂犬病毒液，獲得豬瘟病毒液和豬偽狂犬病毒液，將豬瘟病毒液和豬偽狂犬病毒液按一定比例配制，制備成二聯疫苗。

11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，將豬瘟病毒液和豬偽狂犬病毒液按如下比例配制，使得豬瘟病毒液的含量為1.0×10^4.0TCID₅₀/頭份，豬偽狂犬病毒液的含量為1.0×10^6.0TCID₅₀/頭份。

12.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，使用豬瘟E2蛋白代替培養豬瘟病毒液的步驟，并將豬瘟E2蛋白與培養的豬偽狂犬病毒液按如下比例配制，使得豬瘟E2蛋白的含量20μg/頭份，豬偽狂犬病毒液的含量為1.0×10^6.0TCID₅₀/頭份，制備成二聯疫苗。

13.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法在將豬瘟病毒液和豬偽狂犬病毒液按一定比例配制之后，還包括加入凍干保護劑的步驟。

14.一種豬瘟、豬偽狂犬病二聯疫苗的效力檢驗方法，其特征在于，所述方法采用間接免疫熒光方法，包括以下步驟：將病毒接種于細胞，待細胞長至單層后用丙酮溶液固定，然后加入一抗和二抗，最后根據熒光數計算疫苗效價。

15.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述的細胞為傳代細胞，更優選ST傳代細胞；所述的固定用丙酮溶液優選80％濃度；所述的一抗優選豬抗豬瘟病毒血清；所述的二抗優選兔抗豬IgG(IgG-FITC)。

16.一種權利要求1-9任意一項所述的二聯疫苗在治療和預防豬瘟和豬偽狂犬病的疫苗中應用。