[發(fā)明專利]陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體、制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210219607.X
• 申請日: 2012-06-28
• 公開（公告）號: CN102716500A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁曉飛;李宗海;石必枝
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及改性大分子聚合物及蛋白構(gòu)建的藥物和基因載體、制備方法及應(yīng)用，進一步的說是一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的陽離子高分子脂質(zhì)基因載體、制備方法及應(yīng)用，屬于功能化脂質(zhì)體的制備及應(yīng)用技術(shù)。

背景技術(shù)

近年來，基因組學、蛋白質(zhì)組學等領(lǐng)域取得了大量的進展，獲得了很多有望用于腫瘤基因治療的抑瘤基因、microRNA、siRNA等。但是由于缺乏安全、高效的基因治療載體，這些基因還難以用于腫瘤的臨床基因治療。因此，基因載體是腫瘤基因治療成功的關(guān)鍵；而構(gòu)建一個高效、安全的基因治療載體仍然是目前亟需解決的問題。

理想的腫瘤基因載體應(yīng)具備以下特征：(1)腫瘤靶向性，且不易被免疫系統(tǒng)識別；(2)高度穩(wěn)定，容易制備；(3)無毒；(4)基因轉(zhuǎn)染效率高；（5）基因表達穩(wěn)定并具有腫瘤選擇性。非病毒性載體具有毒性低、免疫原性低、易靶向改造和制備等優(yōu)點，因此有望成為腫瘤臨床基因治療載體的選擇。但是，非病毒載體也存在轉(zhuǎn)染效率低、生物相容性差、體內(nèi)腫瘤靶向性差等問題，因此仍需進一步改進。目前所研究的非病毒載體主要包括：陽離子聚合物(PEI、殼聚糖、PLL等)、脂質(zhì)材料、聚合物嵌段共聚物和膠束等；常用的陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)基因的載體有其優(yōu)越性，然而存在轉(zhuǎn)染效率低、穩(wěn)定性差、部分材料毒性大及制備工藝復雜等問題。脂質(zhì)材料中的陽離子脂質(zhì)體（CL）因具有優(yōu)良的特性（無免疫原性、制備簡單、使用方便、轉(zhuǎn)染效率高等）在科研及臨床實驗中被廣泛應(yīng)用，其通常由一個陽離子、兩個親化合物和一個中性脂質(zhì)組成；但陽離子脂質(zhì)體也存在制備不穩(wěn)定性、細胞毒性大、體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率差等突出問題。為解決這些問題，可將陽離子脂質(zhì)體技術(shù)與陽離子聚合物技術(shù)相結(jié)合，將二者的優(yōu)勢互補，開發(fā)新型的陽離子高分子脂質(zhì)體（CPL）系統(tǒng)；CPL技術(shù)主要采用陽離子聚合物來制備具有雙層膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)體納米粒；與CL和陽離子聚合物相比，CPL具有更高的理化穩(wěn)定性，易于靶向組裝改造，設(shè)計靈活，且適合體內(nèi)基因遞送。本發(fā)明為CPL系統(tǒng)的進一步延伸和發(fā)展。常津，梁曉飛等人報道的殼聚糖長鏈烷基季銨鹽及陽離子高分子脂質(zhì)體為本發(fā)明提供了相關(guān)研究基礎(chǔ)（一類雙親性殼聚糖長鏈烷基季銨鹽及其制備方法，申請?zhí)枺?00710056993.4；一種高分子脂質(zhì)體及其應(yīng)用，專利申請?zhí)枺?00810052465）。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體，主要為構(gòu)建一種制備簡單、成本低廉、安全性好、轉(zhuǎn)染效率高、腫瘤靶向性強的非病毒基因載體系統(tǒng)。

本發(fā)明的目的還是提供一種上述陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體制備方法。

本發(fā)明另一目的是提供一種上述陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體的應(yīng)用。

本發(fā)明采用具有雙親性特性的轉(zhuǎn)鐵蛋白陽性大分子物質(zhì)來代替普通陽離子脂質(zhì)體中的陽性成分，再與普通陽離子脂質(zhì)體的脂質(zhì)成分組合來制備轉(zhuǎn)鐵蛋白大分子陽離子脂質(zhì)基因載體，該轉(zhuǎn)鐵蛋白大分子陽離子脂質(zhì)基因載體具有與普通脂質(zhì)體相類似的雙層膜結(jié)構(gòu)，可包載藥物、結(jié)合基因，并介導DNA/siRNA的轉(zhuǎn)染，可轉(zhuǎn)染的細胞種類多，轉(zhuǎn)染效率高，腫瘤靶向性強，可在含血清的培養(yǎng)液中使用，制備和操作簡單。

本發(fā)明所述的陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體，其關(guān)鍵特征在于使用轉(zhuǎn)鐵蛋白陽性大分子物質(zhì)來代替普通陽離子脂質(zhì)體中所含有的陽性成分，因此可以稱之為陽離子大分子蛋白脂質(zhì)體。陽離子大分子蛋白脂質(zhì)體是將陽離子脂質(zhì)體技術(shù)、蛋白大分子技術(shù)和納米膠束技術(shù)相結(jié)合所開發(fā)的一種與陽離子脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)相同的納米基因載體系統(tǒng)，其具有更優(yōu)良的特性，并有脂質(zhì)體和高分子膠束的優(yōu)點，可將二者的優(yōu)勢互補。本發(fā)明的陽離子大分子蛋白脂質(zhì)體不僅具備小分子脂質(zhì)體的優(yōu)點，且制備方法簡單，穩(wěn)定性好，藥物滲漏少，同時含有氨基和羧基等官能團，易進行多功能化組裝。

本發(fā)明中的陽離子大分子蛋白脂質(zhì)基因藥物載體由轉(zhuǎn)鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質(zhì)成分組成，其中，轉(zhuǎn)鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽與脂質(zhì)成分的質(zhì)量比為0.05~20：1，轉(zhuǎn)鐵蛋白和長鏈烷基季銨鹽的質(zhì)量比0.01~1：1、優(yōu)先選擇的轉(zhuǎn)鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽與脂質(zhì)成分的質(zhì)量比為1~8：1。轉(zhuǎn)鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽作為主膜材構(gòu)成陽離子大分子蛋白脂質(zhì)體的主體，所述的基因載體為具有類似脂質(zhì)體雙層膜結(jié)構(gòu)的納米粒，粒徑在1~100000nm，優(yōu)選10~500nm。