[發明專利]陽離子大分子蛋白脂質基因藥物載體、制備方法及應用

無效

• 申請號: 201210219607.X
• 申請日: 2012-06-28
• 公開（公告）號: CN102716500A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 梁曉飛;李宗海;石必枝
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

1.一種陽離子大分子蛋白脂質基因藥物載體，其特征在于所述的陽離子大分子蛋白脂質基因藥物載體由轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分組成，其中，轉鐵蛋白和長鏈烷基季銨鹽的質量比為0.01~1：1；轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽與脂質成分的質量比為0.05~20：1；粒徑在1~100000nm；

所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽是在極性有機溶劑或水中的溶解度大于0.1mg/mL，蛋白分子量在1000~1000000之間，其中的季銨鹽為氯化物和溴化物；

所述的脂質成分為膽固醇、二油酰脂酰乙醇胺、3β-［N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基］膽固醇、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一種或2-3種，優選為膽固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3β-［N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基］膽固醇；

所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽中的長鏈烷基季銨鹽為十二烷基三甲基溴化銨、十四烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨、二甲基雙十八烷基溴化銨、1，2-二油酰-3-二甲基-羥乙基溴化銨、1，2-二油酰氧丙基-3-二甲基-羥乙基溴化銨、1，2-二油酰氧丙基-3-二甲基-羥丙基溴化銨、1，2-二油酰氧丙基-3-二甲基-羥丁基溴化銨、1，2-二油酰氧丙基-3-二甲基-羥戊基溴化銨、1，2-二棕櫚酰氧丙基-3-二甲基-羥乙基溴化銨、1，2-二硬脂酰氧丙基-3-二甲基-羥乙基溴化銨、1，2-二肉豆蔻酰氧丙基-3-二甲基-羥乙基溴化銨及其上述季銨鹽相應的氯化物；或者是含環氧基團的長鏈烷基季銨鹽:二甲基十八烷基環氧丙基氯化銨、二甲基十六烷基環氧丙基氯化銨、二甲基十四烷基環氧丙基氯化銨、二甲基十二烷基環氧丙基氯化銨及其上述季銨鹽相應的溴化物。

2.如權利要求1所述的陽離子大分子蛋白脂質基因藥物載體，其特征在于所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽中的轉鐵蛋白可由牛血清白蛋白、ProteinA、Protein?G、甲胎蛋白、表皮生長因子受體EGFR的抗體、英夫利西單抗、人纖維蛋白單鏈抗體、癌胚抗原、組織多肽抗原、淀粉酶、乳酸脫氫酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促腎上腺皮質激素、抗利尿激素、生長激素、轉化生長因子、雌激素或孕激素代替。

3.一種如權利要求書1所述的陽離子大分子蛋白脂質基因藥物載體的制備方法，其特征在于通過步驟1）及2）獲得：

1）轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽的制備方法：

將轉鐵蛋白溶解到去離子水和醇的混合溶液中；再將長鏈烷基季銨鹽緩慢的加入到體系中，其中去離子水和醇的質量比為1：0~3；體系中轉鐵蛋白和長鏈烷基季銨鹽的質量比為1：0.01~100；所述的醇為甲醇、乙醇、或異丙醇；在室溫下攪拌24小時后將反應液透析1~500小時，最后凍干，得轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽的白色粉末；

2）轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽與脂質成分進行組裝；組裝的方法為薄膜分散法、逆向蒸發法或透析法：

薄膜分散法的基本步驟為：

將步驟1）獲得的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分共溶于極性有機溶劑中，所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分的質量比為0.05~20：1，所述的極性有機溶劑指二氯甲烷、氯仿、丙酮；混勻作為有機相，除去有機溶劑使成薄膜，然后加入水相使脂質膜水化，水相為0.9%的生理鹽水或pH=5~9的磷酸鹽緩沖溶液；

逆向蒸發法的基本步驟為：

將步驟1）獲得的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分共溶于極性有機溶劑中，所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分的質量比為0.05~20：1，所述的極性有機溶劑指二氯甲烷、氯仿、丙酮；混勻作為有機相；水相為0.9%的生理鹽水或pH=6~9的磷酸鹽緩沖溶液；將水相與有機相混合，水相和有機相的體積比為1：6~6：1，超聲乳化后，旋轉蒸發除去有機溶劑；

透析法的基本步驟為：

將步驟1）獲得的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分共溶于可與水互溶的極性有機溶劑中，所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽和脂質成分的質量比為0.05~20：1，所述的極性有機溶劑指丙酮、異丙醇、乙醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺；混勻作為極性有機相；將極性有機相放入透析袋中在水相溶液中透析1~500小時，水相溶液為0.9%的生理鹽水或pH=6~9的磷酸鹽緩沖溶液；所述的轉鐵蛋白-長鏈烷基季銨鹽、脂質成分和長鏈烷基季銨鹽同權利要求1或2所述。