[發明專利]在乳酸乳球菌表面展示表達幽門螺桿菌蛋白的載體及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210218423.1
• 申請日: 2012-06-28
• 公開（公告）號: CN102796757A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 段廣才;張榮光;程文濱;范清堂;張衛東;郗園林;陳帥印
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12N15/66;A61K39/02;A61P31/04;G01N33/68;A23C9/123;A23L1/00;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種在乳酸乳球菌表面展示表達幽門螺桿菌蛋白的載體，其特征在于：包含有SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列。

2.一種表達幽門螺桿菌蛋白的重組乳酸乳球菌（Lactococcus?lactis）NZ3900/pNZ8110-hpaA-lysM，其特征在于：保藏編號為CGMCC?NO.6115。

3.一種如權利要求1所述的在乳酸乳球菌表面展示表達幽門螺桿菌蛋白的載體的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)以幽門螺桿菌基因組DNA為模板，用PCR方法得到幽門螺桿菌黏附素(HpaA)基因hpaA(SEQ?ID?NO.3)；

2)將得到的hpaA基因與表達載體pNZ8110-lysM(SEQ?ID?NO.1)經酶切后進行連接，連接產物用于轉化大腸桿菌Escherichia?coli?MC1061感受態細胞；

3)篩選陽性轉化菌，從陽性轉化菌中提取質粒，酶切和測序鑒定結果與預期符合的質粒即為在乳酸乳球菌表面展示表達幽門螺桿菌蛋白的載體，將其命名為pNZ8110-hpaA-lysM；

4)用電穿孔法將pNZ8110-hpaA-lysM導入乳酸乳球菌NZ3900菌株，經篩選和鑒定得到重組菌株L.lactis?NZ3900/pNZ8110-hpaA-lysM；

5)培養L.lactis?NZ3900/pNZ8110-hpaA-lysM菌株，用乳酸鏈球菌素Nisin誘導hpaA基因的表達，提取細胞壁蛋白，用SDS-PAGE和Western?blots法檢測蛋白表達。

4.一種如權利要求2所述的表達幽門螺桿菌蛋白的重組乳酸乳球菌菌株在制備抗幽門螺桿菌疫苗方面的應用。

5.一種如權利要求2所述的表達幽門螺桿菌蛋白的重組乳酸乳球菌菌株在制備幽門螺桿菌感染診斷試劑方面的應用。

6.一種如權利要求2所述的表達幽門螺桿菌蛋白的重組乳酸乳球菌菌株作為發酵菌株在食品加工中的應用。

7.一種如權利要求2所述的表達幽門螺桿菌蛋白的重組乳酸乳球菌菌株在乳制品加工方面的應用。