[發(fā)明專利]血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210214017.8
• 申請(qǐng)日: 2012-06-26
• 公開（公告）號(hào): CN102749456A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉萍;張影;宋啟超;范利花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 天津?yàn)I海科緯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的涉及血管緊張素Ⅰ（AngⅠ）化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法。?

背景技術(shù)

高血壓（Hypertension）是一種世界性的常見疾病，世界各地的患病率高達(dá)10%~20%，并可導(dǎo)致腦血管、心臟、腎臟的病變，是危害人類健康的主要疾病。據(jù)衛(wèi)生部最新數(shù)據(jù)，我國(guó)現(xiàn)有高血壓患者2億多人，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人民生活水平的提高，高血壓已日益成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。?

血管緊張素Ⅰ（AngiotensinⅠ，AngⅠ）由腎素作用于血管緊張素原形成。腎素能催化血管緊張素原亮氨酸（Leu）與纈氨酸（Val）間的肽鍵水解產(chǎn)生十肽血管緊張素Ⅰ。血管緊張素Ⅰ在正常血漿濃度下沒有生物學(xué)活性，而是作為血管緊張素Ⅱ的前體存在。血管緊張素Ⅰ能刺激腎上腺髓質(zhì)分泌腎上腺素，它直接收縮血管的作用不明顯；血管緊張素Ⅱ能使全身小動(dòng)脈收縮而升高血壓，此外，還可促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)分泌醛固酮，醛固酮作用于腎小管，起保鈉、保水、排鉀作用，從而引起血量增多，血壓升高。?

正常情況下，由于腎素分泌很少，血中血管緊張素也少，對(duì)血壓調(diào)節(jié)不起明顯作用。但當(dāng)大失血時(shí)，由于動(dòng)脈血壓顯著下降使腎血流量減少，血管緊張素生成增多，對(duì)防止血壓過度下降而使血壓回升卻起重要作用。腎血管長(zhǎng)期痙攣或狹窄的患者，因腎血流量減少，血管緊張素生成增多可導(dǎo)致腎性高血壓。此外，血管緊張素可引起血管強(qiáng)烈收縮，但在正常情況下不參與血?壓調(diào)節(jié)。當(dāng)機(jī)體處于失血等情況而使循環(huán)血量減少時(shí)，該激素在血中濃度將顯著升高，對(duì)保持循環(huán)血量和維持動(dòng)脈血壓起一定作用.?

目前對(duì)血管緊張素Ⅰ目前臨床上常用的測(cè)定血管緊張素Ⅰ的方法是放射免疫分析技術(shù)（RIA）和酶聯(lián)免疫分析法（ELISA），但是這兩種方法存在諸多不足，例如RIA存在放射性污染、標(biāo)記物半衰期短、對(duì)操作者具有放射性損傷，且操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)；而ELISA靈敏度低，檢測(cè)范圍窄；隨著標(biāo)記免疫技術(shù)的迅速發(fā)展，各種新的檢測(cè)方法層出不窮，例如ELISA方法、時(shí)間分辨免疫分析法、免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光發(fā)等。其中，化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）是將化學(xué)發(fā)光和酶免疫分析結(jié)合在此技術(shù)上發(fā)展起來的，起步于80年代初，在90年代得到了快速發(fā)展和應(yīng)用，是當(dāng)今最為敏感的微量免疫測(cè)定法，具有靈敏度高（檢測(cè)極限10^-17-10^-19）、可測(cè)定物質(zhì)濃度范圍寬、試劑有效期長(zhǎng)、操作簡(jiǎn)單快速、穩(wěn)定性好、安全無環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)，目前以廣泛應(yīng)用到基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，成為取代RIA和ELISA的首選技術(shù)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的問題是提供血管緊張素Ⅰ的化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒及其制備方法，解決了靈敏度低，檢測(cè)范圍窄的缺陷。?

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒包括：AngⅠ抗體包被板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的AngⅠ、AngⅠ校準(zhǔn)品、AngⅠ質(zhì)控品、發(fā)光液A液和B液、20倍濃縮洗液。?

所述的血管緊張素Ⅰ抗體包被板的固相載體為96孔或48孔的白色微孔?板。所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的辣根過氧化物酶純度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。所述的發(fā)光液A包含0.7g/L魯米諾和0.165g/L對(duì)碘酚；發(fā)光液B包含0.675g/L過氧化脲。所述的20倍濃縮洗液包括75.5g/L?Tris，120g/L?NaCl，5mL/L?Tween-20，1g/LProclin300。?

一種制備上述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：?

1）AngⅠ抗體包被板制備?

將AngⅠ抗體用pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋至1-10ug/mL，在每個(gè)微孔板的孔中加100uL，于4℃冰箱中放置過夜，用洗滌液洗滌五次之后，用牛血清蛋白溶液對(duì)微孔板進(jìn)行封閉，棄去孔內(nèi)液體后，將酶標(biāo)板干燥，密封，即得經(jīng)AngⅠ抗體包被的微孔板；?

2）辣根過氧化物酶標(biāo)記AngⅠ，得AngⅠ酶結(jié)合物；?

利用高碘酸鈉氧化法，將AngⅠ與辣根過氧化物酶連接在一起，形成經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的AngⅠ；?

3）AngⅠ校準(zhǔn)品；?

將AngⅠ抗原用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋成系列濃度（濃度分別為0，0.2，0.5，2，5，12ng/mL），于2~8℃保存?zhèn)溆谩?

4）AngⅠ質(zhì)控品的配制：在正常人血清中加入適量的AngⅠ純品，配制低值質(zhì)控品（QcL）和高值質(zhì)控品（QcH），其濃度的平均值分別為0.46ng/mL和10.35ng/mL。?