[發(fā)明專利]血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210214017.8
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN102749456A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉萍;張影;宋啟超;范利花
• 申請（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

1.血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：AngⅠ抗體包被板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的AngⅠ、AngⅠ校準(zhǔn)品、AngⅠ質(zhì)控品、發(fā)光液A液和B液、20倍濃縮洗液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的血管緊張素Ⅰ抗體包被板為包被有AngⅠ抗體的96孔或48孔白色微孔板。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的辣根過氧化物酶純度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的AngⅠ質(zhì)控品包括低值質(zhì)控品和高質(zhì)質(zhì)控品，其中低值質(zhì)控品的濃度范圍是0.37～0.55ng/mL，高質(zhì)質(zhì)控品的濃度范圍是8.28～12.42ng/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的發(fā)光液A包含0.7g/L魯米諾和0.165g/L對碘酚；發(fā)光液B包含0.675g/L過氧化脲。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管緊張素Ⅰ化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的20倍濃縮洗液包括75.5g/L?Tris，120g/L?NaCl，5mL/LTween-20，1g/LProclin300。

7.一種制備所述權(quán)利要求1的試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）AngⅠ抗體包被板制備

將AngⅠ抗體用pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋至1～10ug/mL，在每個微孔板的孔中加100uL，于4℃冰箱中放置過夜，用洗滌液洗滌五次之后，用牛血清蛋白溶液對微孔板進行封閉，棄去孔內(nèi)液體后，將酶標(biāo)板干燥，密封，即得經(jīng)AngⅠ抗體包被的微孔板；?

2）辣根過氧化物酶標(biāo)記AngⅠ，得AngⅠ酶結(jié)合物；

利用高碘酸鈉氧化法，將AngⅠ與辣根過氧化物酶連接在一起，形成經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的AngⅠ；

3）AngⅠ校準(zhǔn)品；

將AngⅠ用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋成系列濃度，濃度分別為0，0.2，0.5，2，5，12ng/mL，于2~8℃保存?zhèn)溆茫?/p>

4）AngⅠ質(zhì)控品的配制：在正常人血清中加入適量的AngⅠ純品，配制低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品，其濃度的平均值分別為0.46ng/mL和10.35ng/mL；

5）配制發(fā)光液A液和B液

A液是含有0.7g/L魯米諾和0.165g/L對碘酚的pH8.6的5mmol/LTris·HCl緩沖液；B液是濃度為0.675g/L的過氧化脲，用工藝用水配制；

6)配制20倍濃縮洗液

20倍濃縮洗液的配方如下：75.5g/L?Tris，120g/L?NaCl，5mL/L?Tween-20，1g/LProclin300；

7）組裝

將上述試劑組裝成盒，儲存于2～8℃；

8）對采用該方法制得的試劑盒進行物理檢查，準(zhǔn)確度、劑量-反應(yīng)曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質(zhì)控品的測定值和穩(wěn)定性進行測定。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述的包被板為包被有AngⅠ抗體的96孔或48孔白色微孔板。?