[發明專利]NT-proBNP雙抗夾心快速檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210212074.2
• 申請日: 2012-06-26
• 公開（公告）號: CN102692512A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 蘇恩本;顏彬;陳玲;許行尚;嚴行波;王勇;黃力
• 申請（專利權）人: 南京基蛋生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于臨床醫學診斷領域，具體涉及一種NT-proBNP雙抗夾心快速檢測試劑盒。

背景技術

心力衰竭是一種常見的臨床綜合征，由于其嚴重性和高額的治療護理費用，該病癥的早期診斷顯然是十分必要的。人們一直致力于尋找預測心力衰竭癥狀發生前標志物。目前研究表明心肌細胞產生并分泌具有排鈉利尿活性的肽：心房來源的肽，其為de?Bold等人在大鼠中發現的ANP（心房鈉尿肽）（Life?Science?1981,?vol.28(1):89-94）和專利EP?418?308的發明者及Sudoh等人(1988)Nature?332:78-81在豬和人中發現的BNP（腦鈉尿肽）。

人類BNP基因片段位于1號染色體斷臂，其上游與ANP基因片段相連，由1900個核苷酸組成。mRNA含900-1000個核苷酸。表達產物含信號肽。信號肽降解后的產物為前體BNP?(pro-BNP)，含108個氨基酸：

HPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGVWKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRAPR₇₆S₇₇PKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH₁₀₈。

它在其分泌過程之前和/或之中在氨基酸Arg76和Ser77之間進行切割，從而被切割成BNP，也被稱為BNP(77-108)或BNP-32或BNP(1-32)，以及該激素原的N端部分，BNP(1-76)，也被稱為proBNP的N端片段或NT-proBNP。

目前，體外診斷市場中比較權威和常用的NT-proBNP測試為Roche診斷公司的全自動Elecsys?NT-proBNP檢測。該檢測原理是夾心反應及電化學發光檢測，設計用于大規模中心實驗室，并且為了進行測試，除了精確計量的液體試劑外，還需要相對復雜的儀器來定量液體和檢測發光信號，操作比較繁瑣和復雜。該檢測的多克隆抗體（PAB）是NT-proBNP的一種非常特別的部分，能夠識別包括1-21和39-50位氨基酸的NT-proBNP的表位。然而，研究表明這些多克隆抗體不適用于采用顆粒標記例如膠體金作為標記物的NT-proBNP快速檢測，因為由于快速檢測的組分之間的物理化學相互作用，這類抗體在信號產生方面顯示出令人不滿意的可變性。這導致在不同批次間測試效果具有相當大的波動性。

中國專利200410095878.4提供了一種采用特殊抗體組合的用于測定NT-proBNP的免疫快速測試，雖然解決了Elecsys?NT-proBNP檢測操作繁瑣的特點。然而，其所采用的最優抗體組合MAB18.4.34(27-31)與PAB(39-50)在敏感度和實際臨床測試方面不盡如人意。Hughes,D.等，Clin.?Sci.?96?(1999)?373-380，報道了由proBNP氨基酸37-49相應肽所產生的并與之反應的抗體并不與完整的內源proBNP反應。根據這樣的測定，無法區別患有左心室功能障礙的患者和正常對照。

因此，關于心力衰竭的早期診斷，對于改善用檢測N-末端proBNP的試劑盒方法總存在著需求。

發明內容

本發明的目的是提供一種敏感度更高、更適宜用于臨床檢測的試劑盒，用于快速測定NT-proBNP。

本發明的目的可通過以下技術方案予以實現：

一種NT-proBNP雙抗夾心快速檢測試劑盒，包括試紙條底襯，以及試紙條底襯上順次相互搭接粘貼的樣品墊、涂覆抗體-顆粒標記物的聚酯膜、包被膜及吸水紙，包被膜上設有相互平行的包被鼠抗人IgG抗體的控制線和檢測線，所述檢測線包被有與待檢抗原特異性結合的抗體。

本發明中采用的術語PAB(X-Y)表示一種多克隆抗體，其靶向包括X到Y位的氨基酸的NT-proBNP表位。MAB?(X-Y)為一種靶向包括X至Y位氨基酸的NT-proBNP表位的單克隆抗體。

所述抗體-顆粒標記物，優選MAB（10-39）被固定于顆粒標記物。

所述顆粒標記物為彩色的乳膠、金屬溶膠標記物、聚合物標記物或半導體納米微晶體，優選金標記物。

所述包被膜抗體，優選PAB(59-71)包被在包被膜上。

所述PAB（59-71）來源于免疫哺乳動物，尤其是綿羊、山羊或兔子。

所述MAB（10-39）購自南京強欣生物技術有限公司。

所述PAB（59-71）的制備方法，步驟如下：

1）克隆如SEQ?ID?NO:1所示的基因片段；