[發明專利]多肽和其編碼多核苷酸及它們在治療缺血相關醫學病癥中的應用

在審

• 申請號: 201210210646.3
• 申請日: 2007-07-31
• 公開（公告）號: CN102796741A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: E.布賴特巴特;L.班喬;R.塔爾
• 申請（專利權）人: 脈管生物生長有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C07K14/47;A61K38/17;A61K48/00;A61P9/10;A61P9/14;A61P17/02;A61P1/16;A61P15/00;A61P27/02;A61P19/08
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 林毅斌;李進

本申請為分案申請，原申請的申請日為2007年7月31日，申請號為200780035863.0(PCT/IL2007/000959)，發明名稱為“多肽和其編碼多核苷酸及它們在治療缺血相關醫學病癥中的應用”。?

發明領域及背景?

本發明涉及多肽和其編碼多核苷酸及它們在治療缺血相關醫學病癥中的應用。?

血管生成是從之前存在血管上芽生新的血管。它可在多種生理條件下發生，例如女性生殖周期，以及包括腫瘤、組織缺血和傷口愈合的病理學條件。?

缺血性心臟病是很多工業化國家中死亡率的主要原因，僅在美國每年引起超過500000例的死亡。當前的治療選擇包括藥物治療、冠狀動脈血管成形術以及更具侵入性的冠狀動脈搭橋術(CABG)。?

但是，在所有這些案例中，技術性問題包括所涉及動脈的大小、缺少恰當的末梢脈管系統、導致阻塞的動脈損傷的復雜性以及患者的一般臨床病癥經常阻止缺血組織的血管再形成。?

近來研發出一種侵入性較小的方法——治療性血管生成。該術語指引入旨在促進缺血組織新血管形成的促血管新生因子，從而減輕缺血。已有兩個主要方法用于治療性血管生成領域；第一個是以裸露DNA形式或用病毒載體傳遞多種細胞因子的血管生成基因療法，最常用的是血管內皮生長因子(VEGF)和成纖維細胞生長因子(FGF)。另一最新方法是用完全分化的細胞、內皮祖細胞或間充質干細胞的細胞治療。兩種方法均在動物模型和初期臨床試驗中顯示成功。?

但是，在治療性血管生成成為缺血病患者的真正臨床選擇之前仍?然存在很多障礙需要克服。?

對于血管生成基因療法，這些障礙包括轉基因表達的組織特異性需求、傳遞載體的選擇、劑量和時間的優化、給藥途徑的優化以及不良事件例如水腫和發生腫瘤的可能性。?

血管生成基因療法成功的另一個限制是新形成血管不夠成熟以及它們之后的退化，從而阻止顯著而持久的治療效果。這有可能是因為所遞送的血管生成基因僅在相對較短的時間段內表達使得無法發生血管成熟和平滑肌細胞募集，或者因為血管成熟需要多種血管生成因子才能發生。可能的解決辦法是使用能同時激活多種血管生成因子的上游血管生成調節劑，從而與生理學血管生成更加相似。這一因子是低氧誘導因子1(HIF-1)。?

低氧誘導因子(HIF-1)是一種轉錄因子，是缺氧響應的主要調節劑，在低氧狀態下可活化多于40個基因。它是由兩個亞單位組成的雜二聚體轉錄因子；亞單位α受到氧水平的嚴密調節并在低氧時被誘導，而亞單位β不論氧張力如何可組成型表達。?

HIF-1α包含兩個轉活結構域(N-TAD和C-TAD)和一個氧-依賴型降解結構域(ODDD)。在常氧條件下蛋白質von-Hippel-Lindau(VHL)與HIF-1α的ODDD相互作用并作為E3-泛素連接酶復合物的一部分，因此將HIF-1α送至蛋白體降解。在低氧下，HIF-1α與HIF-1β二聚體化并活化其核內目標基因的轉錄。?

最近已顯示VHL與HIF-1α的相互作用由HIF-1α蛋白內的兩個特異殘基的脯氨酰羥基化作用促成(Epstein，A.C.等，2001，Cell?107，43-54.Masson，N等，2001，Embo?J?20，5197-206)。?

已發現有三種脯氨酰羥基化酶(PHD?1-3)可在常氧下羥基化HIF-1α。PHD?1和2在殘基402和564處羥基化而PHD?3僅在殘基564處羥基化。?

HIF-1α的第二種調控機制發現于2002年(Lando，D等，2002，Science?295，858-61)并包括殘基803處HIF-1α的天冬酰胺酰羥基化作?用，由天冬酰胺酰羥化酶催化，也稱作因子抑制HIF-1(FIH-1)。這一羥基化作用阻止HIF-1α與輔因子p300的相互作用，因此妨礙了HIF-1α的轉錄活性。?

因此，在常氧下有兩種機制與HIF-1α活性的降低有關，一種通過脯氨酰基羥基化作用影響其穩定性，另一種通過天冬酰胺酰基羥基化作用影響其轉錄活化。?

這些脯氨酰基和天冬酰胺酰基羥化酶均為雙加氧酶，它們為2-酮戊二酸并且不依賴鐵離子，它們對細胞氧的需求可提供它們作為氧傳感器活性的基礎。?