[發明專利]HIV-1 LTR上順式元件突變的真核細胞系統及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210209034.2
• 申請日: 2012-06-21
• 公開（公告）號: CN103509754A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 朱煥章;林師冠;孔垂瑾;曲喜英
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種真核細胞系統，其特征在于，所述真核細胞系統包括以下細胞：

(a)基因組中整合有野生型HIV?1LTR和報告基因，從而穩定表達整合的報告基因的真核細胞；和

(b)基因組中整合有突變型HIV?1LTR和報告基因，從而穩定表達整合的報告基因的真核細胞。

2.如權利要求1所述的真核細胞系統，其特征在于，所述整合有野生型HIV1LTR和報告基因的真核細胞是將野生型HIV?1LTR和報告基因插入pCDNA3.0載體得到的重組質粒轉染真核細胞得到的，所述整合有突變型HIV?1LTR和報告基因的真核細胞是將突變型HIV?1LTR和報告基因插入pCDNA3.0載體得到的重組質粒轉染真核細胞得到的。

3.如以上權利要求中任一項所述的真核細胞系統，其特征在于，所述真核細胞可穩定傳代。

4.一種制備權利要求1-3中任一項所述真核細胞系統的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(a)構建包含野生型HIV?1LTR和報告基因的重組質粒和/或包含突變型HIV?1LTR和報告基因的重組質粒；

(b)利用(a)所述的重組質粒分別轉染真核細胞；和

(c)篩選、挑出整合有所述重組質粒并穩定表達所述報告基因的單克隆細胞株并發育成相應細胞系。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述包含野生型HIV?1LTR和報告基因的重組質粒是將野生型HIV?1LTR和報告基因插入pCDNA3.0載體得到的，所述包含突變型HIV?1LTR和報告基因的重組質粒是將突變型HIV?1LTR和報告基因插入pCDNA3.0載體得到的。

6.如權利要求1-3中任一項所述的真核細胞系統在篩選HIV-1治療藥物中的用途。

7.一種篩選HIV?1表達激活劑的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(a)將待測物質施用于權利要求1-3中任一項所述真核細胞系統中(a)所述的真核細胞；和

(b)檢測所述真核細胞中報告基因的表達情況；

如果與所述待測物質施用前所述報告基因的表達情況相比，所述報告基因的表達增強，則所述待測物質是HIV?1表達激活劑。

8.一種質粒，其特征在于，所述質粒包含野生型HIV?1LTR和報告基因，或突變型HIV?1LTR和報告基因。

9.一種真核細胞，其特征在于，所述真核細胞整合有突變型HIV?1LTR和報告基因，從而穩定表達整合的所述報告基因。

10.如權利要求9所述的真核細胞，其特征在于，所述真核細胞能穩定傳代。