[發明專利]一種檢測去氫甲睪酮的酶聯免疫試劑盒及使用方法

無效

• 申請號: 201210206694.5
• 申請日: 2012-06-21
• 公開（公告）號: CN102707073A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 董英;姚萍
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒，其特征在于包括：DMT特異性抗體、DMT-載體蛋白偶聯物和酶標二抗。

2.根據權利要求1所述一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒，其特征在于DMT特異性抗體、DMT-載體蛋白偶聯物和酶標二抗三者體積組成比例為1:2:2。

3.根據權利要求1所述一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒，其特征在于其中DMT特異性抗體為鼠抗DMT的單克隆抗體，用DMT與載體蛋白偶聯物作為免疫原通過免疫BALB/c小鼠制得；所述載體蛋白為牛血清白蛋白（BSA），所述DMT與載體蛋白的偶聯物通過將DMT和載體蛋白用活化酯法進行偶聯得到。

4.根據權利要求1所述一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒，其特征在于還進一步包括用于固定DMT與載體蛋白偶聯物的載體物質，如聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯；載體的形式是微量反應板凹孔。

5.根據權利要求1所述一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒，其特征在于所述的試劑盒還可以進一步包括DMT標準溶液、底物顯色劑、洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液；

所述的洗滌液為0.5%吐溫-20磷酸鹽緩沖液；

所述的顯色劑由體積比為1:19的顯色劑A液和顯色劑B液組成，顯色劑A液為過氧化氫，顯色劑B液為四甲基聯苯胺；

所述的濃縮樣品稀釋液為0.01M，PH7.4的磷酸鹽緩沖液。

6.權利要求1所述一種快速檢測DMT的酶聯免疫試劑盒檢測樣品中DMT含量的方法，其特征在于按照下述步驟進行：

（1）樣品前處理：取10?g絞碎的豬肉的空白樣品置于50?mL離心管中；添加一定量的DMT標準液后加入叔丁基甲醚20?mL，渦旋混勻器混勻1?min，置于超聲波發生器中超聲波提取10?min，取出8000?r/min離心5?min，有機相轉移至另一支50?mL離心管中；下層再用20?mL叔丁基甲醚分2次提取，有機相轉移至對應離心管中；40?℃旋轉蒸發，加2?%甲醇-PBS定容至10?mL；進行ELISA測定；

（2）用試劑盒進行檢測，向包被有去氫甲睪酮抗原的酶標板孔中加入標準品或樣品溶液，再加入去氫甲睪酮單克隆抗體，孵育后洗滌排干，加入酶標記二抗，孵育后洗滌排干，顯色、終止，用酶標儀測定吸光度值；

（3）分析檢測結果。