[發明專利]硫酸阿米卡星注射液中雜質的檢測方法

在審

• 申請號: 201210206258.8
• 申請日: 2012-06-20
• 公開（公告）號: CN103512965A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 劉長海;常靚;陸峰;張明媛;張軍東
• 申請（專利權）人: 上海信誼藥廠有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳哲鋒

技術領域

本發明涉及一種硫酸阿米卡星注射液中雜質的檢測方法，具體涉及以柱前衍生化-HPLC法對硫酸阿米卡星注射液中已知雜質D卡那霉素的檢測方法。

背景技術

硫酸阿米卡星注射液的主要成分是硫酸阿米卡星，本品對多數腸桿菌科細菌如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬等均具有良好作用，可用于治療革蘭陰性桿菌所致的各種嚴重感染等。

歐洲藥典、英國藥典中均指明了硫酸阿米卡星注射液中有四種已知雜質，分別為雜質A、B、C、D，而中國藥典中僅僅控制了已知雜質A，該雜質為合成過程中產生的雜質，在注射液生產及貯存過程中，雜質A的量不會增加。而已知雜質D卡那霉素為降解雜質，在制劑制備及貯存過程中含量會有所增加。且卡那霉素的腎毒性和耳毒性均強于阿米卡星，臨床應用卡那霉素后還會產生造血系統毒性反應，引起白細胞減少，嚴格控制其限度是化學分析工作中的重要環節。

按照《中國藥典》2010年版硫酸阿米卡星注射液有關物質項下方法對已知雜質D進行方法學考察，主藥硫酸阿米卡星濃度為10mg/mL時，雜質D卡那霉素的平均回收率較低，為66.29%，RSD為19.6%；歐洲藥典、英國藥典中規定衍生化樣品應貯存在10℃環境下，經考察，在該溫度下，樣品穩定性較差，24h內測得卡那霉素的含量下降了76.5%。可見，采用藥典方法對雜質D卡那霉素進行定量測定是不準確的。因此，提供一種硫酸阿米卡星注射液中已知雜質卡那霉素的檢測方法，是有關方面所十分需要的。

發明內容

本發明所解決的技術問題是現有檢測方法中回收率低、穩定性差的缺點，提供一種準確、穩定的檢測方法，用于檢測硫酸阿米卡星注射液中已知雜質D卡那霉素的含量。

本發明一方面一種檢測硫酸阿米卡星注射液中雜質D卡那霉素的含量的方法，所述方法包括以下步驟：

量取硫酸阿米卡星注射液，加水稀釋制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-5mg的溶液，經衍生化處理后，作為測試溶液；

量取卡那霉素對照品，加水稀釋成每1mL中含10-50μg卡那霉素的溶液，經衍生化處理后，作為卡那霉素對照品溶液；

量取卡那霉素對照品溶液5-100μL注入高效液相色譜儀，調節檢測器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的30-60%；

量取測試溶液與對照品溶液各10-100μL，分別注入高效液相色譜儀；測試溶液的色譜圖中如有與卡那霉素保留時間一致的色譜峰，根據卡那霉素標準曲線得到測試溶液中雜質卡那霉素的含量。

在本發明的一個優選實例中，所述衍生化處理包括：量取0.2mL待處理溶液至10mL量瓶中，加1.0%的2,4,6-三硝基苯磺酸溶液2mL和吡啶3mL；然后強力振搖30秒；將量瓶置水浴保溫2小時，然后在冷水中冷卻2分鐘；然后在量瓶中加入冰醋酸2mL；強力振搖30秒后用水稀釋至刻度，并搖勻。

在本發明的一個優選實例中，所述水浴的溫度為50-100℃，較好60-90℃，更好為70-80℃，最好75℃。

在本發明的一個優選實例中，所述鹽酸阿米卡星注射液一般加水稀釋制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-4mg的溶液，更好加水稀釋制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-3mg的溶液，最好加水稀釋制成每1mL中含硫酸阿米卡星2mg的溶液。

在本發明的一個優選實例中，卡那霉素對照品加水稀釋成每1mL中含15-40μg卡那霉素的溶液，更好加水稀釋成每1mL中含15-30μg卡那霉素的溶液，最好加水稀釋成每1mL中含20μg卡那霉素的溶液

在本發明的一個優選實例中，量取卡那霉素對照品溶液10-90μL注入高效液相色譜儀，更好量取卡那霉素對照品溶液20-80μL注入高效液相色譜儀，最好量取卡那霉素對照品溶液40-60μL注入高效液相色譜儀。

在本發明的一個優選實例中，主成分色譜峰的峰高為滿量程的30-60%，較好為滿量程的40-60%，更好為滿量程的45-55%，最好為滿量程的55%。

在本發明的一個優選實例中，量取測試溶液與對照品溶液各10-100μL分別注入高效液相色譜儀，較好量取測試溶液與對照品溶液各10-90μL分別注入高效液相色譜儀，量取測試溶液與對照品溶液各20-80μL分別注入高效液相色譜儀，量取測試溶液與對照品溶液各40-60μL分別注入高效液相色譜儀。

在本發明的一個優選實例中，上述測試溶液和對照品溶液存放在5-40℃環境中，較好在10-30℃環境中，更好在20-25℃環境中，最好為室溫。