[發明專利]痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的應用

有效

• 申請號: 201210203125.5
• 申請日: 2012-06-19
• 公開（公告）號: CN103505475A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 熊慧
• 申請（專利權）人: 熊慧
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61P15/00;A61P17/12;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑在制備預防和治療附件炎、子宮頸糜爛、尖銳濕疣、外陰白斑藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑是由粉刺丙酸桿菌經滅活破碎后提取有效組份制備的無細胞制劑，粒度為10～1000nm，優選10～800nm，更優選10～500nm。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述粉刺丙酸桿菌的菌號為76-27、H-84或77-1，優選77-1。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的熱原小于320EU/ml，蛋白質的質量百分比含量為6～60％，核酸的質量百分比含量為4-40％，其余為多糖；優選所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑熱原小于120EU/ml，蛋白質的質量百分比含量為20～40％，核酸的質量百分比含量為4～20％，其余為多糖。

5.一種權利要求1～4中任一項所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)粉刺丙酸桿菌工作種子批菌種連續2～4次傳代后接種于大瓶或培養罐，在培養基中培養5～10天：

(2)收集無雜菌污染的菌體，加熱煮沸15～60分鐘得到滅活菌液；

(3)無菌試驗合格的菌液經洗滌后，在無菌條件下用破碎裝置破碎菌體；

(4)菌體破碎后的懸液經離心后收集沉淀，洗滌沉淀制成懸液；

(5)將懸液分裝后加熱滅菌，得到痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑。

6.根據權利要求5所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的粉刺丙酸桿菌的菌號為76-27、H-84或77-1，培養基選自硫乙醇酸鹽、蛋白胨、肝或酵母透析液培養基中的一種，優選不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養基；步驟(1)中的培養條件為36～37℃。

7.根據權利要求5所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述的破碎裝置為超高壓射流對撞機，壓力為500～1000kgf/cm²，破碎至少1次，將菌體破碎到粒度小于1000nm、優選粒度10～800nm。

8.根據權利要求5所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述的洗滌是將沉淀物用無菌生理鹽水離心洗滌至少2次；在步驟(4)中，菌體破碎后懸液的離心條件是在4℃～室溫下，6000～20000rpm離心30～150分鐘；所述的洗滌是將沉淀物用無菌生理鹽水離心洗滌1～5次；在步驟(5)中，所述的加熱為在60～65℃加熱0.5～2小時。

9.根據權利要求5所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，其特征在于，進一步包括將步驟(5)得到的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑分裝后，西林瓶在60±2℃加熱30分鐘或121℃加熱15～30分鐘。

10.根據權利要求5或6所述的痤瘡丙酸桿菌無細胞制劑的制備方法，其特征在于，所述的培養基為經過膜孔徑2萬分子量超濾或0.22μm膜過濾的培養基。