[發(fā)明專(zhuān)利]一種雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體、及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210196927.8
• 申請(qǐng)日: 2012-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102731649A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱建國(guó);李本強(qiáng);王曼;張艷玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/10
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/10;C12N15/13;C12N15/63;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 上海新天專(zhuān)利代理有限公司 31213
• 代理人: 張澤純

1.一種雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體，其至少具有如SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)、如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和位于輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)之間的中間連接肽。

2.如權(quán)利要求1所述的單鏈抗體，其特征在于其具有如SEQ?ID?No.3所示的氨基酸序列。

3.一種編碼權(quán)利要求1所述的單鏈抗體的基因。

4.如權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于其具有SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求4所述的基因，其特征在于所述核苷酸序列中進(jìn)一步包含內(nèi)切酶位點(diǎn)NotI、NcoI，其中NcoI為CCATGG，NotI為GCGGCCGC。

6.含有權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的基因的表達(dá)載體。

7.如權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體，其特征在于所述載體為原核表達(dá)載體。

8.如權(quán)利要求7所述的表達(dá)載體，其特征在于所述載體為pOPE101-XP載體。

9.一種制備如權(quán)利要求1所述的雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體的方法，包括以下步驟：

（1）采用RT-PCR直接從ND?GA/VA疫苗免疫的雞脾臟RNA中擴(kuò)增出抗體編碼基因的重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因；

（2）利用SOE-PCR法將linker與VH基因和VL基因相連構(gòu)建雞源性單鏈抗體基因；

（3）將步驟（2）的雞源性單鏈抗體基因克隆到原核表達(dá)載體pOPE101-XP中，構(gòu)建重組質(zhì)粒；

（4）將步驟（3）的原核表達(dá)載體pOPE101-XP轉(zhuǎn)化入E.coli?JM109感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)、表達(dá)單鏈抗體；

（5）分離純化步驟（4）所得培養(yǎng)產(chǎn)物即獲得所述雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體。

10.如權(quán)利要求1或2所述的雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體在用于制備雞新城疫的診斷試劑和診斷試劑盒中的應(yīng)用。

11.如權(quán)利要求1或2所述的雞源性抗雞新城疫病毒的單鏈抗體在用于制備雞新城疫的預(yù)防和/或治療藥物中的應(yīng)用。