[發明專利]一種固相片段法合成比伐盧定的方法

有效

• 申請號: 201210196621.2
• 申請日: 2012-06-14
• 公開（公告）號: CN102731624A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 姚程成;楊毅躍;康國偉;蒙相鋒
• 申請（專利權）人: 無錫市凱利藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種固相片段法合成比伐盧定的方法，包括以下步驟：

1)由替代度為0.4～0.9mmol/g的Wang?Resin和Fmoc-Leu-OH反應制備Fmoc-Leu-Wang?Resin，再按序列依次連接12個含Fmoc保護基氨基酸，得13肽片段I-Wang?Resin；

2)由替代度為0.4～0.9mmol/g的Wang?Resin和Fmoc-Gly-OH反應制備Fmoc-Gly-Wang?Resin，再按序列依次連接剩余的6個含Fmoc保護基氨基酸，得7肽片段-2-Chlorotrityl?Chloride?Resin，裂解得Fmoc保護N端的7肽片段II；

3)13肽片段I-Wang?Resin與7肽片段II以固相片段法合成比伐盧定-Wang?Resin，經脫保護，裂解，純化冷凍干燥得純比伐盧定。

2.根據權利要求1所述的一種固相片段法合成比伐盧定的方法，其特征在于，Fmoc-Leu-OH和Wang?Resin在DIC+HOBt+DMAP作用下反應制備Fmoc-Leu-Wang?Resin；固相逐步合成13肽片段I-Wang?Resin，其中Fmoc保護的氨基酸為：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH和Fmoc-Gly-OH。

3.根據權利要求1所述的一種固相片段法合成比伐盧定的方法，其特征在于，制備7肽片段II，其中Fmoc-Gly-OH和2-Chlorotrityl?Chloride?Resin在DIEA作用下反應制備Fmoc-Gly-2-Chlorotrityl?Chloride?Resin；其中Fmoc保護的氨基酸為：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH和Fmoc-D-Phe-OH，裂解試劑為TFA-DCM。

4.根據權利要求1-3任意一項權利要求所述的一種固相片段法合成比伐盧定的方法，其特征在于，反應介質為無水DMF或DCM，脫Fmoc保護基試劑為哌啶/DMF，洗滌試劑為無水DMF、DCM和CH₃OH，活化試劑為：A+B+C，其A為HOAt或HOBt，B為HBTU或HATU或TBTU，C為DIEA或DIC。

5.根據權利要求1-3任意一項權利要求所述的一種固相片段法合成比伐盧定的方法，其特征在于，氨基酸活化溫度為1～10℃，偶聯、裂解溫度為1～30℃。

6.根據權利要求1-3任意一項權利要求所述的一種固相片段法合成比伐盧定的方法，其特征在于，13肽片段I-Wang?Resin為：

Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Wang?Resin；

7肽片段II-2-Chlorotrityl?Chloride?Resin為：

Fmoc-D-Phe-Pro-Arg(pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-2-Chlorotrityl?Chloride?Resin。