[發(fā)明專利]一種α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測(cè)方法、底物和試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210195780.0
• 申請(qǐng)日: 2012-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103484525A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫宏博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京和信非凡生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/34
• 分類號(hào): C12Q1/34;C07H17/075;G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，同時(shí)又屬于遺傳代謝病的臨床診斷檢測(cè)領(lǐng)域。具體而言本發(fā)明提供了一種測(cè)定α-N-乙酰氨基葡糖苷酶（α-N-acetylglucosaminidase，EC?3.2.1.50）酶活力的方法，同時(shí)本發(fā)明還提供了一種作為α-N-乙酰氨基葡糖苷酶（α-N-acetylglucosaminidase，EC?3.2.1.50）的酶活性檢測(cè)的底物，此外本發(fā)明還提供了測(cè)定α-N-乙酰氨基葡糖苷酶（α-N-acetylglucosaminidase，EC?3.2.1.50）酶活性的試劑。?

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背景技術(shù)

溶酶體是人體細(xì)胞內(nèi)一種由單位膜包裹的細(xì)胞器，內(nèi)部含有多種酸性水解酶，目前已發(fā)現(xiàn)的有60多種，如蛋白酶、核酸酶、糖苷酶、脂酶、磷酸酶、溶菌酶等酶類。在細(xì)胞內(nèi)溶酶體酶控制著多種內(nèi)源性和外源性大分子物質(zhì)的消化，如核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、多糖及糖原等，因此，溶酶體又被稱為細(xì)胞內(nèi)的消化器官。人體每天的新陳代謝會(huì)產(chǎn)生許多人體不需要的大分子物質(zhì)，如鞘脂、糖蛋白、粘脂、黏多糖、寡糖、糖原等，這些大分子物質(zhì)需經(jīng)過(guò)溶酶體酶處理后水解成小分子物質(zhì)方能繼續(xù)參與機(jī)體代謝或排出體外。如果溶酶體內(nèi)某種水解酶的活性降低或缺失將會(huì)導(dǎo)致特定的生物大分子不能正常降解而在溶酶體中貯積，從而使得溶酶體發(fā)生腫脹，細(xì)胞變得臃腫失常，細(xì)胞功能受到嚴(yán)重影響，最終導(dǎo)致一系列疾病，這類疾病統(tǒng)稱為溶酶體貯積癥（Lysosomal?Storage?Diseases，簡(jiǎn)稱LSDs）。依貯積的大分子物質(zhì)種類差異將溶酶體貯積癥分成以下幾種主要類型：粘多糖貯積癥、糖原累積病Ⅱ型、黏脂質(zhì)貯積病、神經(jīng)鞘脂貯積病、糖蛋白貯積癥等。?

據(jù)歐美國(guó)家初步統(tǒng)計(jì)資料表明，溶酶體貯積癥作為一個(gè)整體，在新生兒中患病率可高達(dá)1/8,000～1/5,000。目前在中國(guó)尚未進(jìn)行篩查統(tǒng)計(jì)，但隨著生化檢測(cè)技術(shù)的提高，國(guó)內(nèi)溶酶體貯積癥的檢出率明顯提高，且呈逐步上升趨勢(shì)。?

黏多糖貯積癥(mucopolysaccharidosis，MPS)是一組溶酶體貯積癥，是由于溶酶體內(nèi)某些水解酶缺陷，造成酸性黏多糖(葡糖氨基聚糖)降解受阻導(dǎo)致黏多糖在體內(nèi)積聚而引起一系列臨床癥狀的疾病。?

黏多糖貯積癥屬先天性或原發(fā)性代謝異常綜合征。根據(jù)尿糖中所含酸性黏多糖的種類，相關(guān)個(gè)別酶缺乏或活性低下的種類以及臨床表現(xiàn)和影像學(xué)表現(xiàn)的不同，將黏多糖貯積癥分為7大類型，分別為：?

MPS-I、MPS-II、MPS-III、MPS-IV、MPS-VI、MPS-VII、MPS-IX。

黏多糖貯積癥IIIB（MPS-IIIB）型為常染色體隱性遺傳疾病，是由于α-N-乙酰氨基葡糖苷酶(α-N-acetylglucosaminidase)功能低下或缺失所致，與MPS-ⅢA、MPS-ⅢC和MPS-ⅢD同屬于MPS-Ⅲ型。?

黏多糖貯積癥IIIB型確診困難表現(xiàn)在多方面：首先因該病是多系統(tǒng)疾病，涉及遺傳、神經(jīng)、肌肉、血液、骨骼、眼睛等器官或系統(tǒng)，癥狀表現(xiàn)復(fù)雜，并且與多種常見(jiàn)疾病有相似的臨床表現(xiàn)，因此醫(yī)生很難從癥狀表現(xiàn)上積累診斷經(jīng)驗(yàn)，因此漏診、誤診及延誤診斷的發(fā)生是普遍存在的問(wèn)題。其次醫(yī)院現(xiàn)有的各項(xiàng)常規(guī)檢查等輔助手段均難以達(dá)到確診的目的，如骨髓穿刺、體格檢查、心電圖、腦電圖、B超、CT/核磁、X線、肌肉活檢、血清肌酸磷酸激酶檢查等諸多檢查方法均無(wú)法對(duì)黏多糖貯積癥IIIB型的真正致病因素加以分析，因此不能對(duì)患者疾病作出準(zhǔn)確診斷。基因檢測(cè)困難重重，因單核苷酸序列多態(tài)性的存在，可能某些突變就是正常的，不會(huì)引發(fā)疾病，因此給分析帶來(lái)不確定性；另外由于酶的活性還與其他一些參與酶功能的基因有關(guān)，有很多這類基因目前還未被研究人員發(fā)現(xiàn)，因此基因檢測(cè)同樣不能作為診斷的可靠依據(jù)。?