[發(fā)明專利]一種α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測方法、底物和試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210195780.0
• 申請日: 2012-06-14
• 公開（公告）號: CN103484525A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫宏博
• 申請（專利權(quán)）人: 北京和信非凡生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C07H17/075;G01N21/64
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1.一種α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性測定方法，其特征在于它的原理如下：

R-α-N-乙酰氨基葡糖?+?H2O?^{α-N-乙酰氨基葡糖苷酶}R-OH?+?α-N-乙酰氨基葡糖。

2.具體為：α-N-乙酰氨基葡糖苷酶在特定條件下能夠水解合成的本身無熒光的底物R-α-N-乙酰氨基葡糖，釋放游離的熒光分子R-OH，在特定的激發(fā)和發(fā)射波長下可檢測到R-OH特異的熒光，由于α-N-乙酰氨基葡糖苷酶水解底物的速率與釋放熒光分子的熒光強(qiáng)度成正比，因此檢測在特定激發(fā)波長和發(fā)射波長下的R-OH熒光值，就可以計算出α-N-乙酰氨基葡糖苷酶的酶活力。

3.如權(quán)利要求書1所述的底物R-α-N-乙酰氨基葡糖，其特征在于它的通用結(jié)構(gòu)式為：

具體描述該結(jié)構(gòu)式的特征在于：在母體結(jié)構(gòu)（α-N-乙酰氨基葡糖）的1位C的醛基（-CHO）和具備熒光特征的R-OH特異連接生成R-α-N-乙酰氨基葡糖，生成的R-α-N-乙酰氨基葡糖已經(jīng)連接了熒光基團(tuán)R，但R-α-N-乙酰氨基葡糖本身不具備熒光特征。

4.當(dāng)α-N-乙酰氨基葡糖苷酶在特定條件下特異的水解R-α-N-乙酰氨基葡糖時又可以釋放出游離的具備熒光特征的R-OH分子。

5.如權(quán)利要求書1和2所述的底物R-α-N-乙酰氨基葡糖以及合成該底物的具備熒光特征的R-OH，其特征在于R-OH是在物理和化學(xué)領(lǐng)域普遍被接受的任何具備熒光特征且能與-CHO進(jìn)行反應(yīng)的分子。

6.如權(quán)利要求書1-3所述的底物R-α-N-乙酰氨基葡糖，其特征在于熒光分子R-OH是與α-N-乙酰氨基葡糖上的1位C上的醛基（-CHO）連接而形成R-α-N-乙酰氨基葡糖。

7.如權(quán)利要求書1-4所述的底物R-α-N-乙酰氨基葡糖，其特征在于氨基乙酰基團(tuán)是處在α-N-乙酰氨基葡糖分子的2位C上。

8.一種α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于其主要成分包括：

???緩沖液???????????????????????????????????????20—1000mmol/L

???pH范圍???????????????????????????????????????3—9.5

???穩(wěn)定劑????????????????????????????????????????0.01%—10%

???如權(quán)利要求書1-5所述的底物（R-α-N-乙酰氨基葡糖）??0.02—10mmol/L

根據(jù)權(quán)利要求6所述α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩(wěn)定劑、R-α-N-乙酰氨基葡糖組成單劑試劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩(wěn)定劑、R-α-N-乙酰氨基葡糖組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑組成；試劑2，由緩沖液、R-α-N-乙酰氨基葡糖組成。

10.9．根據(jù)權(quán)利要求6所述α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于：由緩沖液、穩(wěn)定劑、R-α-N-乙酰氨基葡糖組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑組成；試劑2，由R-α-N-乙酰氨基葡糖組成。

11.10．根據(jù)權(quán)利要求6-9所述α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于：所述的穩(wěn)定劑主要包括被物理和化學(xué)上普遍接受和使用的各種表面活性劑。

12.如權(quán)利要求6-9所述α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于：所述的緩沖液中的緩沖試劑是被物理和化學(xué)上普遍接受的能將體系的pH值緩沖或穩(wěn)定在3—9.5的范圍中的試劑。

13.如權(quán)利要求書1-11所述的α-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性檢測試劑，其特征在于，它可以用于檢測待測樣本中的α-N-乙酰氨基葡糖苷酶的酶活力，特別是檢測人體體液或組織或細(xì)胞樣本中α-N-乙酰氨基葡糖苷酶的酶活力，應(yīng)用到臨床檢測或診斷與α-N-乙酰氨基葡糖苷酶的酶活力相關(guān)的疾病。