[發明專利]一種以人乳頭瘤病毒HPV的DNA解旋酶E1為靶點的抗HPV病毒藥物的虛擬篩選方法

有效

• 申請號: 201210195233.2
• 申請日: 2012-06-14
• 公開（公告）號: CN102750459A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 蘆秀麗;高兵;張勇;陳樹超;劉汀;賈丹
• 申請（專利權）人: 遼寧大學
• 主分類號: G06F19/16
• 分類號: G06F19/16;A61K45/00;A61P35/00;A61P31/20
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術領域

本發明涉及藥物篩選方法，尤其涉及以HPV?E1為靶點、利用分子對接進行的新型抗HPV病毒藥物的虛擬篩選方法。

背景技術

宮頸癌是嚴重危害婦女健康和生命的疾病，每年約有50萬新發病例，25萬人死亡，是引起婦女死亡的第二大原因，其中大部分在發展中國家，占80%左右。宮頸癌是我國女性生殖道惡性腫瘤中發病率最高的一類腫瘤。據統計，我國每年新發宮頸癌病例約13.5萬人，其中約5萬人因此喪生，使廣大婦女的身心健康和生命安全受到嚴重威脅。1977年德國學者Zur?Hausen等從宮頸癌標本中發現了人乳頭狀病毒（human?papillomavirus，HPV）DNA，推測HPV感染與宮頸癌發生有關(Zur?H.at?el.,Cancer?Res,1976,36:?530.)。進一步的分子流行病學證據表明，HPV與人類多種癌癥，特別是與宮頸癌有著密切的關系。由國際癌癥研究機構（IARC）組織在22個國家進行了針對引起侵襲性宮頸癌（ICC）的HPV類型的調查。組織學確診為ICC的1000個病例中有99.7%發現HPV?DNA陽性，?其中HPV的類型主要為HPV16（53%）和HPV18（15%）。由于HPV與多種癌癥有關，對人類危害極大，預計抗HPV病毒藥物將成為今后的研發和市場熱點，受到更多關注。

傳統的藥物篩選無論是動物水平篩選還是高通量細胞平臺篩選，都存在著天然藥物及食物成分復雜，從確認提取物有潛在功效到確定有效成分，到最終分離出單體成分需要花費大量的人力、時間和精力，效率極低。因此，近年來虛擬篩選方法發展和在新藥研究中的應用受到了廣泛的重視。于是建立一套高效、有效、速效抗HPV病毒藥物和防治宮頸癌藥物篩選體系成為當務之急。

發明內容

本發明的目的是建立一種新穎，快速，高效的一種以人乳頭瘤病毒HPV的DNA解旋酶E1為靶點的抗HPV病毒藥物的虛擬篩選方法，以豐富現有的篩選方法。

本發明利用先進的計算機虛擬篩選技術，結合HPV藥物體外細胞模型篩選方法，旨在發現一批能有效結合HPV?E1蛋白（HPV基因組編碼的蛋白中唯一的酶類蛋白，具有ATP依賴的?DNA解旋酶活性）的活性部位從而抑制其ATP依賴的解旋酶活性的藥物，從而阻斷HPV病毒的復制進而達到預防以及治療宮頸癌以及其他HPV病毒感染所致疾病的目的。

本發明，利用計算機進行藥物虛擬篩選最關鍵的是基礎理論研究的可靠性以及相關靶點的選擇。所有的乳頭瘤病毒都含有一個小的環狀的雙鏈只能編碼八個特異性蛋白的DNA（如圖1所示）。眾多的高度保守的蛋白中，只有E1解旋酶具有酶活性。E1蛋白約68kDa，在HPV陽性細胞中低水平表達，其主要的生化特性是具有ATP酶和3’→?5’解旋酶活性，能夠識別HPV的復制起點。E1蛋白識別并結合到富含AT的HPV復制起點序列，在E2蛋白的配合下，解除HPV?的DNA超螺旋，讓復制復合物進入并啟動DNA復制。因為E1是病毒復制和發病機制的根本，所以在抗HPV病毒藥物的研究中，E1是具有較大吸引力的靶點。這一點在白尾野兔乳頭瘤病毒模型中已經得到驗證(Wu,?X.,?W.?Xiao,?and?J.?L.?Brandsma.?1994;?J.?Virol.?68:6097–6102)。