[發(fā)明專利]一種重組染色質(zhì)修飾蛋白1A及其編碼基因和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210194127.2
• 申請日: 2012-06-12
• 公開（公告）號: CN102718856A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 由振強;宣堯仙;辛艷飛;張立將;陳云祥;陳國燦;楊紅忠;陳穎;周國亮;李峰;徐潘生
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省醫(yī)學科學院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00;C12R1/84
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種重組染色質(zhì)修飾蛋白1A，包括染色質(zhì)修飾蛋白1A，其特征在于，所述染色質(zhì)修飾蛋白1A的C端連接His-Tag，N端連接PTD序列，所述PTD序列的氨基酸序列為YGRKKRRQRRR，所述重組染色質(zhì)修飾蛋白1A的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述重組染色質(zhì)修飾蛋白1A的基因，堿基序列如SEQ?ID?NO.4所示。

3.一種包括權(quán)利要求2所述基因的重組載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于，原始載體為pPIC9K載體。

5.一種包括權(quán)利要求2所述基因的轉(zhuǎn)化子。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的轉(zhuǎn)化子，其特征在于，宿主細胞為畢赤酵母(Pichia?pastoris)KM17。

7.如權(quán)利要求1所述的重組染色質(zhì)修飾蛋白1A在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求1所述的重組染色質(zhì)修飾蛋白1A的制備方法，包括：

(1)提取人胎盤組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；

(2)以cDNA為模板，利用堿基序列分別如SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的引物P3和引物P4，進行PCR擴增；

(3)將步驟(2)的擴增產(chǎn)物連接于載體pGEM-T?Easy中，得到質(zhì)粒pGEM-T-Chmp1A；

(4)以質(zhì)粒pGEM-T-Chmp1A為模板，利用堿基序列分別如SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的引物P1和引物P2，進行PCR擴增；

(5)步驟(4)的PCR產(chǎn)物回收后，經(jīng)EcoR?I和Not?I雙酶切，連接于載體pPIC9K中，得到質(zhì)粒pPIC9K-PTD-Chmp1A；

(6)將質(zhì)粒pPIC9K-PTD-Chmp1A轉(zhuǎn)入畢赤酵母KM17；

(7)對內(nèi)含質(zhì)粒pPIC9K-PTD-Chmp1A的畢赤酵母KM17進行誘導培養(yǎng)，從培養(yǎng)基中分離純化得到所述的組染色質(zhì)修飾蛋白1A。