[發明專利]一種甘蔗液體淺層培養方法

有效

• 申請號: 201210193814.2
• 申請日: 2012-06-13
• 公開（公告）號: CN102668989A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 林慶良;許莉萍;高世武;陳如凱
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種植物種苗培育方法，具體涉及一種甘蔗液體淺層培養方法，屬生物技術領域。

背景技術

甘蔗（Saccharum?Complex）是我國最主要的糖料作物，甘蔗糖產量占我國食糖總產的92%，因此，蔗糖生產關系我國食糖安全，而蔗糖生產則取決于原料甘蔗的生產，種苗質量直接影響原料蔗的產量和品質。

????甘蔗組織培養，一方面可以擴大其繁殖系數，從而實現規模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的優良性狀的基礎上，實現甘蔗種苗的脫毒和快速繁殖。甘蔗組織培養的成本主要包括組培苗生產所需的培養基、設施設備的折舊費、供電成本、耗材和人工成本。常規的甘蔗組織培養方法要求接種過程、培養過程都在無菌培養基中進行，無菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通過培養基改造，獲得既保證甘蔗組織正常生長，又具有殺菌、抗菌或抑菌功能的培養基，菌類也就不能在培養基中滋生。由于這種改造后的培養基不需要進行高溫高壓滅菌，一方面可以降低甘蔗組織培養對設施設備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設備，縮減了投資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用液體淺層培養方法，又可以省去瓊脂粉的用量，從而使組培成本更低。采用這種培養基開展甘蔗組織培養，組培環節大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，組織培養過程中的污染問題得到有效控制，甘蔗組織培養無需在嚴格的無菌環境中進行，從根本上簡化了甘蔗組織培養。

????申請號為201110311185.4的發明專利申請“一種開放式培養甘蔗脫毒種苗的方法”，介紹了一種培養基無需高壓滅菌，不需要超凈工作臺，接種只要在自然、開放的環境中進行的開放式培養甘蔗脫毒種苗的方法，從根本上簡化組培環節，可降低組培成本20%；但是，組培苗的增殖系數和壯苗數/叢，還是有局限性。

本發明的甘蔗液體淺層培養方法，建立了甘蔗液體淺層培養的技術體系，使培養成本更低，瓶苗更壯，為甘蔗種苗生產提供了一種很實用的關鍵技術。

發明內容

本發明的目的是提供一種甘蔗液體淺層培養方法。?

本發明的目的是通過以下方法實現的。

　　本發明的一種甘蔗液體淺層培養方法，包括抑菌劑的配制、培養容器消毒、培養基配制、誘導培養、增殖培養、生根培養和瓶苗移栽，其特征在于：

　　1.?抑菌劑的配制：使用益培隆殺菌劑配制抑菌劑1號和抑菌劑2號。抑菌劑1號的配制方法：在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20?ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，并用蒸餾水定容到100?ml，即為抑菌劑1號；抑菌劑2號的配制方法：在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20?ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，加入1g頭孢霉素，并用蒸餾水定容到100?ml，即為抑菌劑2號；所述益培隆殺菌劑由A瓶藥劑和B瓶藥劑組成，由市場購得；

　　2.?培養容器消毒：將培養瓶及瓶蓋在抑菌劑1號與水的體積比為0.3?%～0.5?%（Ｖ/Ｖ）的水溶液中浸泡不少于10?h，保存備用；

?　　3.?培養基配制：誘導培養基為；MS＋2.0?mg/L?6-BA?＋0.5～2.0?mg/L?KT?+5?ml/L抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖，pH5.8；增殖培養基為MS+0.5～1?mg/L?6-BA+0.5～1?mg/L?KT+3～5?ml/L抑菌劑2號+30.0?g/L蔗糖，pH5.8；生根培養基為1/2MS+1～3?mg/L?NAA?+3ml/L抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖；所述MS培養基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌吟；所述KT，指6-糠氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培養基時，先不加抑菌劑2號，按各培養基配方配齊其他原料后，定容、煮開，當溫度冷卻至50℃時，再按各培養基配方添加抑菌劑2號，用1?mol/L的NaOH或1?mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到培養容器中，封口，冷卻后備用；

　　4.?誘導培養：取健壯的甘蔗植株，從最高肥厚帶往下30?cm處切下，用75%（Ｖ/Ｖ）的酒精表面消毒；剝離外層葉鞘，取含生長點0.5～1cm長的莖尖，接種到誘導培養基上。誘導培養基的液面與培養瓶底面的距離為0.3～0.5cm，15天轉接一次；培養室溫度為25～28?℃，光照12h，光照強度為1200?～1500?lx；