[發明專利]一種甘蔗液體淺層培養方法

有效

• 申請號: 201210193814.2
• 申請日: 2012-06-13
• 公開（公告）號: CN102668989A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 林慶良;許莉萍;高世武;陳如凱
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種甘蔗液體淺層培養方法，包括抑菌劑的配制、培養容器消毒、培養基配制、誘導培養、增殖培養、生根培養和瓶苗移栽，其特征在于：

　　（1）抑菌劑的配制：使用益培隆殺菌劑配制抑菌劑1號和抑菌劑2號，抑菌劑1號的配制方法：在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20?ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，并用蒸餾水定容到100?ml，即為抑菌劑1號；抑菌劑2號的配制方法：在益培隆殺菌劑A瓶藥劑中加入20?ml蒸餾水稀釋后與B瓶藥劑混合，加入1g頭孢霉素，并用蒸餾水定容到100?ml，即為抑菌劑2號；

　　（2）培養容器消毒：將培養瓶及瓶蓋在抑菌劑1號與水的體積比為0.3?%～0.5?%的水溶液中浸泡不少于10?h，保存備用；

?　?（3）培養基配制：誘導培養基為；MS＋2.0?mg/L?6-BA?＋0.5～2.0?mg/L?KT?+5?ml/L抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖，pH5.8；增殖培養基為MS+0.5～1?mg/L?6-BA+0.5～1?mg/L?KT+3～5?ml/L抑菌劑2號+30.0?g/L蔗糖，pH5.8；生根培養基為1/2MS+1～3?mg/L?NAA?+3ml/L抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖；所述MS培養基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌吟；所述KT，指6-糠氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培養基時，先不加抑菌劑2號，按各培養基配方配齊其他原料后，定容、煮開，當溫度冷卻至50℃時，再按各培養基配方添加抑菌劑2號，用1?mol/L的NaOH或1?mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到培養容器中，封口，冷卻后備用；

　　（4）誘導培養：取健壯的甘蔗植株，從最高肥厚帶往下30?cm處切下，用75%（Ｖ/Ｖ）的酒精表面消毒；剝離外層葉鞘，取含生長點0.5～1cm長的莖尖，接種到誘導培養基上，誘導培養基的液面與培養瓶底面的距離為0.3～0.5cm，15天轉接一次；培養室溫度為25～28?℃，光照12h，光照強度為1200?～1500?lx；

　　（5）增殖培養：取0.2?cm²誘導培養的叢生芽．接種到增殖培養基上，增殖培養基的液面與培養瓶底面的距離為0.8～1cm，15天轉接一次；培養室溫度為25～28?℃，光照12h，光照強度為1200?～?1500?lx；

　??（6）生根培養：將苗高不低于2.0cm、且莖粗不小于0.2cm的增殖苗，轉入生根培養基上，生根培養基的液面與培養瓶底面的距離為0.8～1cm，20～30天移栽；培養室溫度為25～28?℃，光照12h，光照強度為1200?～1500?lx；

　　（7）瓶苗移栽：將生根苗取出后，洗凈根部的培養基，用800倍的多菌靈浸泡30min后移栽至穴盤，放到大棚內；移栽的基質為河沙，種植后澆透水，大棚上層用50%以上的遮光網遮蓋，移栽的環境溫度為20～32℃。

2.?根據權利要求1所述的一種甘蔗液體淺層培養方法，其特征在于所述器皿消毒，將培養瓶及瓶蓋在體積比為0.5%抑菌劑1號的水溶液中浸泡10h。

3.根據權利要求1所述的一種甘蔗液體淺層培養方法，其特征在于所述培養基配制的內容如下：誘導培養基為；MS＋2.0?mg/L?6-BA?＋1.0?mg/L?KT?+5?ml/L抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖，pH5.8；增殖培養基為MS+1?mg/L?6-BA+1mg/L?KT+5?ml/L抑菌劑2號+30.0?g/L蔗糖，pH5.8；生根培養基為1/2MS+3?mg/L?NAA?+5ml/L?抑菌劑2號＋30?g/L蔗糖；配制培養基時，先不加抑菌劑2號，按各培養基配方配齊其他原料后，定容、煮開，當溫度冷卻至50℃時，再按各培養基配方添加抑菌劑2號，用1?mol/L的NaOH或1?mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到培養容器中，封口，冷卻。