[發明專利]一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法

有效

• 申請號: 201210191328.7
• 申請日: 2012-06-12
• 公開（公告）號: CN102703358A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 黃祖新;黃鎮;顏林春;湯二將
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/085;C12R1/10;C12R1/07;C12R1/125
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是：

1）取ACCC10608臘狀芽孢桿菌、ACCC11090地衣芽孢桿菌、ACCC10615短小芽孢桿菌、ACCC10618枯草芽孢桿菌和ACCC10152納豆芽孢桿菌各1株，分別接種于營養肉汁瓊脂斜面培養基上，37℃培養18～24h，制成5種芽孢桿菌一級種子；

2）將5種芽孢桿菌斜面培養基的一級種子用無菌水刮洗下來，分別放入內裝無菌玻璃珠的滅菌三角瓶中，振蕩，分別制成均勻的菌懸液；

3）菌懸液經80℃水浴加熱10min后，以占液體培養基5%體積的接種量，分別接入液體培養基中，培養制成5種芽孢桿菌二級種子液；

4）將5種芽孢桿菌二級種子液分別經80℃水浴加熱10min后，按占自動控溫發酵罐中液體培養基10%體積的接種量，分別接入5個自動控溫發酵罐，以150r/min，37℃培養20～25h，制成5罐芽孢桿菌擴大培養種子液；

5）分別取出5罐中的芽孢桿菌擴大培養種子液進行混合，按照體積量比例為臘狀芽孢桿菌：地衣芽孢桿菌：短小芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌：納豆芽孢桿菌=1：1：1：0.5：0.5配制成芽孢桿菌混合液備用；

6）以小麥和豌豆為原料，分別將小麥和豌豆進行粉碎成粉，按重量計，豌豆粉：小麥粉=1：4～5比例混合后經過蒸汽殺菌、冷卻后作為曲料粉備用;

7）將備用的芽孢桿菌混合液加水稀釋后加入到曲料粉中，混合拌勻成帶菌的曲料，將帶菌的曲料裝入曲模踩曲、出模后的曲塊放置陰干1.5小時后搬入曲房；

8）在曲房里曲塊進行第一次自然升溫培菌發酵培養，發酵培養過程中位于曲房里中間位置的曲塊溫度控制在58℃之內，培養后曲塊通風晾干、粉碎為曲塊粉，備用；

9）將小麥和高粱分別進行粉碎成粉，與步驟8中備用的曲塊粉，以重量計曲塊粉：高粱粉：小麥粉=3：1：6進行混合拌勻成曲料干粉；按照曲料干粉的重量加35%水拌成濕曲料，用稀氨水調整pH為7.2～7.5，將濕曲料裝入曲模踩曲，出模曲塊放置1.5小時后搬入曲房進行第二次自然升溫培菌發酵培養，發酵培養過程中位于曲房里中間位置的曲塊溫度控制在溫度68℃之內，經第二次自然升溫培菌發酵培養后曲塊在曲庫房貯存3～4個月后出庫即制成芽孢桿菌高溫大曲的成品曲。

2.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是營養肉汁瓊脂斜面培養基的配方為：蛋白胨5g?、牛肉膏30g、NaCl?5g?、瓊脂15g、1L蒸餾水，pH值7.0。

3.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的液體培養基組成為：1L蒸餾水、20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、0.5g牛肉膏，pH值7.0。

4.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的菌懸液接種于液體培養基后，是在37℃、pH值7.0條件下，以200r/min，培養20～48h制成5種芽孢桿菌二級種子液。

5.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的小麥粉要求能過20目篩子的粗麥粒含有小麥表皮65%，小麥細粉35%；高粱粉要求能過40目篩子的碎粒30%，細粉70%；豌豆粉以細粉為佳。

6.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的芽孢桿菌混合液是按照1?：15～20的體積比加水稀釋；稀釋后的芽孢桿菌混合液是按1kg曲料粉加入0.04kg芽孢桿菌稀釋液的比例進行混合拌勻。

7.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的第一次自然升溫培菌發酵培養，是指曲塊自然升溫培菌發酵5～6天后，待中間曲塊溫度上升至56～58℃時進行翻曲，翻曲后控制曲溫不超過翻曲時最高曲溫，經9～10天左右進行再次翻曲，再經過15～20天培菌，曲塊通風晾干后粉碎為曲塊粉，供下一步工序備用。

8.根據權利要求1所述的一種芽孢桿菌高溫大曲的制備方法，其特征是所述的第二次自然升溫培菌發酵培養，是指先培養5～6天后待中間曲塊溫度上升至65～68℃時進行翻曲，翻曲后控制曲溫不超過翻曲時最高曲溫，經9～10天左右進行再次翻曲，30～40天后將曲塊搬入庫房貯存，在曲庫房貯存3～4個月后出庫即制成芽孢桿菌高溫大曲的成品曲。