[發明專利]一種乳制品中全氟化合物的免疫親合色譜-超高效液相色譜-質譜連用快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210190624.5
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN103487515A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 朱江;郭小品;盧聰;羅啟仕;楊潔;孟梁;朱杰;郭琳;李忠元;張長波;李青青;王旌;高潔;朱悅
• 申請（專利權）人: 上海市環境科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N33/531
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技術領域

本發明涉及一種免疫親合色譜-超高效液相色譜-質譜連用快速檢測方法，尤其涉及乳制品以及水體中全氟化合物檢測方法的新技術。?

背景技術

全氟化合物(Perfluorinated?compounds，PFCs)以其優良的熱穩定性、化學穩定性、高表面活性及疏水疏油性能，被大量應用于聚合物添加劑、潤滑劑等諸多工業生產和生活用品中。全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane?Sulphonate，PFOS)和全氟辛酸(Perfluorooctanoic?Acid，PFOA)是代表性的PFCs。?

2009年5月聯合國環境規劃署及《關于持久性有機污染物(POPs)的斯德哥爾摩公約》第四次締約方大會就減少并最終禁止使用9種嚴重危害人類健康與自然環境的有毒化學物質達成共識。這9種新的POPs就包括PFOS及其衍生物全氟辛烷磺酸鹽和全氟辛基磺酰氟。由于PFCs的C-F鍵能極大，在正常環境條件下很難降解，不能被傳統的污水處理方法有效去除。Alexander?G.P.估算1970-2002年間全球全氟辛基磺酰化合物的產量為9.6-12.25萬噸，其中海洋表層中存在量估計為235-1770噸。所以PFCs所造成的全球性環境污染已成事實。?

隨著我國乳業的快速發展，乳制品產量和人均消費量大幅度增加，人們對乳品的安全問題提出更高的要求。乳品中全氟化合物污染對人體健康的危害，屬于長時期、微劑量、慢性細微毒性效應，可以導致人體生理生化或者自然免疫功能缺陷、致畸、致癌、致突變等問題。控制乳制品中PFCs污染，確保乳品安全，正日益受到關注，其中奶牛飼料原料和飲用水受PFCs污染是導致牛乳制品中PFCs殘留的重要原因。?

對于PFOS/PFOA等PFCs造成的環境污染，盡管目前國內外已經做了許多研究工作，可是深度和廣度仍遠遠不夠，分析方法尚不夠成熟，復雜環境、生物及食品樣品的分析方法需要進一步完善，經國家標準化管理委員會網站查詢表明，未見PFCs殘留檢測標準方法。PFCs檢測方法研究中對樣品的前處理是一個至關重要的環節。因為PFCs具有疏水疏油的雙重性，屬于痕量環境污染物，而且環境基質如生物樣品往往都成分復雜，所以樣品前處理較困難，已成為制約環境監測和深入研究這類物質環境行為的重要因素之一。?

目前用于PFOS/PFOA環境樣品前處理的技術主要有液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)。LLE是傳統的萃取方法，盡管方法成熟，可是存在如界面易乳化，耗費溶劑，操作煩瑣，實驗誤差大的缺點。SPE是當前主流的萃取手段，反相C18柱及離子交換HLB柱是使用較多?的SPE柱。這些SPE柱盡管萃取效果好于LLE，可仍然存在一些缺點：SPE柱價格較高，雖然理論上可以重復使用，但由于環境樣品的復雜性，往往很少重復使用，使用成本較大；商品化SPE柱的填料易被復雜樣品污染堵塞，柱效下降；PFCs極性差別大，反相或離子交換SPE填料并不適合所有的PFCs萃取，如反相吸附劑對小分子極性化合物沒有足夠的保留，復合弱離子交換吸附劑盡管兼顧離子交換和反相機制，效果好于反相吸附劑，可是對于組織中C10以上全氟酸的回收率卻低于50％。近年來，針對LLE、SPE萃取技術的不足，科學家們不斷地改進，已形成了液-固萃取、加速溶劑萃取、超聲萃取、固相微萃取等新技術。?

免疫親合色譜(Immunoaffinity?Chromatography，IAC)是一項頗具發展潛力的樣品前處理技術，其原理是利用抗原與抗體之間的高親合、高特異而且可逆的“鎖-鑰匙”結合特性和柱層析色譜的差速遷移理論建立的分離富集方法。IAC具有選擇性高、富集能力強、可重復使用的優點，能夠滿足痕量小分子化合物的檢測要求。?

IAC在農藥、獸藥殘留等領域應用的研究較多，部分IAC已經商品化。在環境科學領域，與IAC相關的免疫檢測技術研究已經取得一定成果，而有關IAC用于乳制品樣品前處理的研究報道卻很少。Weilin?L.Shelver最近報道了用于環境多溴聯苯醚(PBDEs)檢測的酶聯免疫吸附方法(ELISA)，檢測限與GC-NCI-MS相當，可達到0.1ppb。研究數據表明ELISA可用于環境、生物樣品的PBDEs檢測，回收率與儀器方法相當。然而，ELISA方法存在不能區分相似結構PBDEs的缺點，這恰說明抗體的寬識別能力，提示IAC技術實際應用的可行性。E.Eljarrat報道了用于二噁英提取的IAC技術。該技術可以選擇性提取五種ppt級的二噁英，并且與傳統的前處理方法相比，IAC可以使處理速度提高20倍，節約100倍的有機溶劑。?