[發明專利]一種乳制品中全氟化合物的免疫親合色譜-超高效液相色譜-質譜連用快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210190624.5
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN103487515A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 朱江;郭小品;盧聰;羅啟仕;楊潔;孟梁;朱杰;郭琳;李忠元;張長波;李青青;王旌;高潔;朱悅
• 申請（專利權）人: 上海市環境科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乳制品中全氟化合物的免疫親合色譜-超高效液相色譜-質譜連用快速檢測方法，其特征在于，制備免疫親合色譜的抗體，實現色譜前處理中PFCs及其衍生物全氟辛烷磺酸鹽和全氟辛基磺酰氟的富集濃縮；運用液相色譜-質譜連用對乳制品PFCs進行定性定量分析并建立典型PFCs及其衍生物全氟辛烷磺酸鹽和全氟辛基磺酰氟的標準曲線，提供最佳分離鑒定效果。

2.根據權利要求1所述的免疫親合色譜-超高效液相色譜-質譜連用快速檢測方法，其特征在于，制備了適用于PFCs及其衍生物的免疫親合色譜柱。

3.根據權利要求2所述的PFCs及其衍生物的免疫親合色譜柱，其特征在于，色譜柱制備的具體步驟包括：人工抗原的合成、多克隆抗體的篩選與鑒定以及IAC柱的研制。

4.根據權利要求3所述的人工抗原的合成，具體包括：a、PFOS/PFOA等PFCs及其結構類似物二羧基或二磺酸基PFCs，通過混合酸酐法與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)、雞卵清白蛋白(OVA)偶聯合成人工抗原；b、人工抗原的純化及鑒定：采用透析的方式進行純化；通過HPLC、MS、SDS-PAGE凝膠電泳、IR等鑒定手段對所合成的人工抗原進行鑒定，判定偶聯效果，計算結合比。

5.根據權利要求3所述的多克隆抗體的篩選，具體為：將合成的PFCs-BSA人工抗原注入大白兔，約間隔7-10天注射一次，30天后，取血清進行抗體的特性鑒定。抗體特性及效價采用包被PFCs-OVA的間接競爭ELISA方法，利用酶標羊抗兔抗體進行測定。對于陽性高效價的抗體血清進行收集，并經聚丙烯凝膠電泳或瓊脂雙擴進行抗體純化。純化后抗體效價、特異性測定采用ELISA進行測定。

6.根據權利要求3所述的IAC柱的研制，具體為：將抗體與活化的SepharoseCL-4B偶聯，乙醇胺封閉未偶聯的活性位點，獲得特異性免疫吸附劑。將免疫吸附劑裝柱，平衡，然后進行柱容量、選擇性、富集效率、穩定性測試，洗脫條件的建立，回收率、重復性測定等。

7.根據權利要求1所述的運用液相色譜-質譜連用對乳制品PFCs進行定性定量分析，其特征在于，乳制品的前處理方式為：將樣品過濾紙取200mL，利用固相萃取儀進行凈化分離萃取，收集洗脫液，將洗脫液氮吹至干，7∶3甲醇水定容1mL，渦旋振蕩后用高速冷凍離心機離心，供上機測定。

8.根據權利要求1所述的運用液相色譜-質譜連用對乳制品PFCs進行定性定量分析，其特征在于，高效液相色譜分析方法具體為：

色譜柱：Eclipse?Plus?C18?2.1*50mm

流動相：①A：5mmol/L乙酸銨5％甲醇水溶液；②流動相B：100％甲醇

梯度洗脫程序：

柱溫：45℃

進樣量：10μL

串聯質譜條件具體為：

離子源：ESI，離子化方式ES(-)。

毛細管電壓：2.5kV。

離子源溫度：120℃。

脫氣溶劑溫度：350℃。

碰撞氣流速：0.35mL/min。

掃描模式：多反應(MRM)。

碰撞能量、錐孔電壓：

9.根據權利要求1所述的超高效液相色譜串聯質譜儀分析方法，其特征在于，固相萃取法的加標量為0.4～12.0ng時，平均加標回收率范圍為81.0％～133.5％之間，相對標準偏差在1.4％～7.9％之間。

10.根據權利要求1所述的超高效液相色譜串聯質譜儀分析方法，其特征在于，所測定的十種全氟化合物最低檢出限為0.014～0.076pg/ml。