[發(fā)明專(zhuān)利]一種玉米農(nóng)華101種子純度檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210189795.6
• 申請(qǐng)日: 2012-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102788830A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王璽;蘭星
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京金色農(nóng)華種業(yè)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/447
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/447
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種玉米農(nóng)華101種子純度檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)種子蛋白質(zhì)提取：取單粒種子粉碎后，加入0.6-0.8ml蛋白提取液，搖勻，蓋好后在室溫放置20-40min，加樣前4000-8000rpm離心10-20min；

2)取步驟1)離心后的上清，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳；

3)電泳后將膠板進(jìn)行染色，按農(nóng)華101的標(biāo)準(zhǔn)譜帶鑒別出異品種種子粒數(shù)，計(jì)算品種純度，

其中，所述的蛋白提取液為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15-20％和體積分?jǐn)?shù)為15-20％的冰醋酸的水溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的電極緩沖液為含有體積分?jǐn)?shù)為0.3-0.5％冰醋酸和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.03-0.05％甘氨酸的水溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的分離膠按如下方式制備：

1)制備制膠液：

1號(hào)：90g丙烯酰胺+3g甲叉雙丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；

2號(hào)：60g脲加水溶解并定容至200ml；

3號(hào)：48ml?1M氫氧化鉀+17.2ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml；

5號(hào)：四甲基乙二胺的原液；

6號(hào)：10g過(guò)硫酸銨加水溶解并定容至100ml；

2)灌分離膠：

依次取1號(hào)22.5ml、2號(hào)5ml、3號(hào)3.75ml、6號(hào)1.6ml、5號(hào)0.2ml混合搖勻后，灌入膠室至距頂端2-3cm為止，避免形成氣泡，膠聚合后，用濾紙或注射器吸去析出的水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的濃縮膠按如下方式制備：

1)制備制膠液：

1號(hào)：90g丙烯酰胺+3g甲叉雙丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；

2號(hào)：60g脲加水溶解并定容至200ml；

4號(hào)：48ml?1M氫氧化鉀+2.9ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml。

5號(hào)：四甲基乙二胺的原液；

6號(hào)：10g過(guò)硫酸銨加水溶解并定容至100ml；

2)灌濃縮膠：

依次取1號(hào)3ml、2號(hào)2ml、4號(hào)5ml、6號(hào)0.3ml、5號(hào)0.04ml迅速搖勻后灌入分離膠上面，并立即插入樣品梳，待濃縮膠聚合后拔出樣品梳，用吸去各凹槽中多余的水分。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳中，每個(gè)樣品加樣25-30μl。