[發明專利]一種玉米農華101種子純度檢測方法無效
| 申請號： | 201210189795.6 | 申請日： | 2012-06-08 |
| 公開（公告）號： | CN102788830A | 公開（公告）日： | 2012-11-21 |
| 發明（設計）人： | 王璽;蘭星 | 申請（專利權）人： | 北京金色農華種業科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447 |
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| 地址： | 100080 北京市海*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 玉米 101 種子 純度 檢測 方法 | ||
1.一種玉米農華101種子純度檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)種子蛋白質提取：取單粒種子粉碎后，加入0.6-0.8ml蛋白提取液，搖勻，蓋好后在室溫放置20-40min，加樣前4000-8000rpm離心10-20min；
2)取步驟1)離心后的上清，進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；
3)電泳后將膠板進行染色，按農華101的標準譜帶鑒別出異品種種子粒數，計算品種純度，
其中，所述的蛋白提取液為含有質量分數為15-20％和體積分數為15-20％的冰醋酸的水溶液。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的電極緩沖液為含有體積分數為0.3-0.5％冰醋酸和質量分數為0.03-0.05％甘氨酸的水溶液。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的分離膠按如下方式制備：
1)制備制膠液：
1號：90g丙烯酰胺+3g甲叉雙丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；
2號：60g脲加水溶解并定容至200ml；
3號：48ml?1M氫氧化鉀+17.2ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml；
5號：四甲基乙二胺的原液；
6號：10g過硫酸銨加水溶解并定容至100ml；
2)灌分離膠：
依次取1號22.5ml、2號5ml、3號3.75ml、6號1.6ml、5號0.2ml混合搖勻后，灌入膠室至距頂端2-3cm為止，避免形成氣泡，膠聚合后，用濾紙或注射器吸去析出的水。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳的濃縮膠按如下方式制備：
1)制備制膠液：
1號：90g丙烯酰胺+3g甲叉雙丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；
2號：60g脲加水溶解并定容至200ml；
4號：48ml?1M氫氧化鉀+2.9ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml。
5號：四甲基乙二胺的原液；
6號：10g過硫酸銨加水溶解并定容至100ml；
2)灌濃縮膠：
依次取1號3ml、2號2ml、4號5ml、6號0.3ml、5號0.04ml迅速搖勻后灌入分離膠上面，并立即插入樣品梳，待濃縮膠聚合后拔出樣品梳，用吸去各凹槽中多余的水分。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝膠電泳中，每個樣品加樣25-30μl。
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