[發明專利]利用豬股骨制備降血壓肽的方法

無效

• 申請號: 201210189566.4
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN103014105A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 李誠;付剛;李娜;陳碩;魏庭浩
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科

技術領域

本發明涉及制備降血壓肽的方法，具體涉及一種利用豬股骨制備降血壓肽的方法。?

背景技術

高血壓病是一種常見的多發病，據推測目前世界四分之一的成年人患有高血壓，這一數據預計到2025年會增加到30%。全球約有760萬人由于高血壓病早逝，約占全率13.5%；由高血壓引起的卒中和缺血性心臟病分別達54%和47%。高血壓病已成為一個十分嚴重的社會公共衛生問題。天然食品中的降血壓肽通常是由蛋白質水解酶在溫和條件下水解蛋白質而獲得的一類多肽,具有降壓效果且無副作用。許多動物、植物、微生物蛋白及發酵食品中都含有豐富的降血壓肽,目前已成功地從牛奶、魚、貝、雞蛋、大豆、清酒和酒粕、玉米、麥胚等食物中分離出了各種不同的ACE抑制肽。?

我國是一個畜牧業大國，在肉類生產中，每年產生近2000萬噸的各類畜禽骨，絕大多數的畜禽骨沒有得到充分利用。這不僅浪費了寶貴的蛋白質資源，而且對環境造成嚴重的污染。目前，對骨的開發利用多集中在對骨鈣研究，而骨蛋白質多集中于調味品和營養強化方面的研究開發，而功能性方面的深入研究報道較少。利用現代高新技術開發高附加值的降壓產品，進一步提高副產物的利用率，對副產制品的工業化和生態環境保護都具有重要意義。?

發明內容

本發明首次以豬股骨為原料制備降血壓肽，并突破性的發現豬股骨不同部位對血壓影響不同，豬骨股干和全股骨膠原多肽在體內沒有顯著降壓效果而豬股骨頭則是降血壓肽的良好來源。本研究以取材容易的豬股骨為原料，提供了一種簡單、易行的降血壓肽制備方法，制備出的降血壓肽與多種食源性材料制備的降血壓產品對比，豬股骨頭膠原蛋白降血壓肽的灌胃量更小，降壓效果也略優，且具有更好的長期降壓效果。同時本研究以NO、PGI2、AngⅡ、ET-1以及TXA2為指標，綜合全面的探索了豬股骨頭膠原多肽的降血壓途徑，發現，該肽除了能通過抑制ACE活性降低血漿AngⅡ濃度，還可通過促進NOS活性顯著升高血漿中NO含量，同時抑制ECE活性降低血漿ET-1含量，三種途徑共同作用，達到降低血壓效果。解決了現有技術中存在的技術問題。?

為解決上述的技術問題，本發明采用以下技術方案：?

一種利用豬股骨制備降血壓肽的方法，包括以下步驟：?

步驟1，將新鮮豬股骨頭進行碎骨、脫脂、浸酸、浸灰和中和淌干備用；?

步驟2，將步驟1中處理好的備用骨料用濃度0.5%的H₂O₂按料液比1:5在常溫下浸泡24h后，用濃度為0.5%的H₂O₂在100℃、pH值8.0條件下處理7小時提取膠原蛋白；?

步驟3，再采用胰蛋白酶在溫度50℃、pH值7.5、底物濃度6%、酶底比8000u/g的條件下酶解豬骨膠原蛋白6小時；?

更進一步的是：?

所述的步驟1包括如下步驟：?

步驟1-1，剔除新鮮豬股骨中的包括殘肉、皮、筋腱的非骨骼成分，將骨破碎成5～10mm左右的小塊，用水清洗去除部分脂肪和血紅蛋白；?

步驟1-2，在石油醚中浸泡24h，以脫去殘余的脂肪；?

步驟1-3，按料液比1:4加入4%的鹽酸浸泡3天，每12h換一次鹽酸，且新舊酸各半，待灰分含量降至0.3%左右；?

步驟1-4，置于0.1%的Ca(OH)₂中進行浸泡5天左右，除去雜蛋白；?

步驟1-5，用大量水清洗Ca(OH)₂及其他雜質，用稀鹽酸調節骨料的pH值至7，使積存在骨料里的Ca(OH)₂生成可溶性的鈣鹽，再用清水沖洗，除掉鹽酸與石灰相互作用生成的氯化鈣和余酸，淌干備用。?

所述的步驟4具體包括如下步驟：?

步驟4-1先將步驟3中獲得的酶解產物過濾；?

步驟4-2，再經過8000r/min離心，取上清，以除去部分沉淀；?

步驟4-3，取15mL上清液加入膜截留量為10kDa的超濾管中于離心力為4000g的離心機中進行15分鐘超濾離心，收集的分子量小于10kDa的濾液15mL加入5kDa膜截留量的超濾管中于離心力為4000g的離心機中進行60分鐘超濾離心，收集的濾液為分子量小于5kDa的肽段組分；步驟4-4，將分子量小于5kDa的組分冷凍干燥后制得肽段粉末，凍藏備用。?

與現有技術相比，本發明的有益效果是：?