[發(fā)明專利]利用豬股骨制備降血壓肽的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210189566.4
• 申請(qǐng)日: 2012-06-11
• 公開（公告）號(hào): CN103014105A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李誠(chéng);付剛;李娜;陳碩;魏庭浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科

1.一種利用豬股骨制備降血壓肽的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1，將新鮮豬股骨頭進(jìn)行碎骨、脫脂、浸酸、浸灰和中和淌干備用；

步驟2，?將步驟1中處理好的備用骨料用濃度0.5%的H2O2按料液比1:5在常溫下浸泡24小時(shí)后，用濃度為0.5%的H2O2?在100℃、pH?值8.0條件下處理7小時(shí)提取膠原蛋白；

步驟3，再采用胰蛋白酶在溫度50℃、pH?值7.5、底物濃度6%、酶底比8000u/g的條件下酶解豬骨膠原蛋白6小時(shí)；

步驟4，用超濾分級(jí)的方法分離純化酶解液中的降血壓肽，取超濾離心后分子量小于5000Da的肽段冷凍干燥后制得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用豬股骨制備降血壓肽的方法，其特征在于：?所述的步驟1包括如下步驟：

步驟1-1，剔除新鮮豬股骨中的包括殘肉、皮、筋腱的非骨骼成分，將骨破碎成5～10mm左右的小塊，用水清洗去除部分脂肪和血紅蛋白；

步驟1-2，在石油醚中浸泡24小時(shí)，以脫去殘余的脂肪；

步驟1-3，按料液比1:4加入4%的鹽酸浸泡3天，每12小時(shí)換一次鹽酸，且新舊酸各半，待灰分含量降至0.3%左右；

步驟1-4，置于0.1%的Ca(OH)2中進(jìn)行浸泡5天左右，除去雜蛋白；

步驟1-5，用大量水清洗Ca(OH)2及其他雜質(zhì)，用稀鹽酸調(diào)節(jié)骨料的pH值至7，使積存在骨料里的Ca(OH)2?生成可溶性的鈣鹽，再用清水沖洗，除掉鹽酸與石灰相互作用生成的氯化鈣和余酸，淌干備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用豬股骨制備降血壓肽的方法，其特征在于：所述的步驟4具體包括如下步驟：

步驟4-1先將步驟3中獲得的酶解產(chǎn)物過濾；

步驟4-2，再經(jīng)過8000r/min離心，取上清，以除去部分沉淀；

步驟4-3，取15mL上清液加入膜截留量為10kDa的超濾管中于離心力為4000g的離心機(jī)中進(jìn)行15分鐘超濾離心，收集的分子量小于10kDa的濾液15mL加入5kDa膜截留量的超濾管中于離心力為4000g的離心機(jī)中進(jìn)行60分鐘超濾離心，收集的濾液為分子量小于5kDa的肽段組分；

步驟4-4，將分子量小于5kDa的組分冷凍干燥后制得肽段粉末，凍藏備用。