[發明專利]一種卵巢早衰非人哺乳動物模型的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201210189504.3
• 申請日: 2012-06-08
• 公開（公告）號: CN103463629A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 孫兆貴;王健;石燕;郁琳;朱燕;蔣雅紅
• 申請（專利權）人: 上海市計劃生育科學研究所
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K38/22;A61K49/00;A61P15/18;C07K14/72;C12N15/12
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 趙向輝;祝蓮君

技術領域

本發明涉及動物模型領域。更具體地說，本發明涉及性成熟前卵巢早衰動物模型的制備以及它們在卵巢早衰藥物開發中的應用。

背景技術

FSH是一種異二聚體糖蛋白，由腺垂體合成分泌，直接參與調控卵巢功能，包括卵泡發育與性激素的合成分泌，其調節作用通過卵泡顆粒細胞上FSH受體(FSHR)信號轉導途徑介導[1]。FSHR是一種典型的G蛋白偶聯受體，與FSH結合后，通過G蛋白介導的腺苷環化酶-環磷酸腺苷(cAMP)信號級聯反應，促進顆粒細胞中芳香化酶的合成，進而促進雌激素的合成分泌。人FSHR是由695個氨基酸(大鼠692個氨基酸)組成的一條肽鏈，其氨基末端17個氨基酸為疏水性信號肽，緊接著是由349個氨基酸(大鼠348個氨基酸)組成的胞外區，是識別結合FSH的區域；然后是由264個氨基酸組成的含有7個跨膜螺旋結構的跨膜區；最后是由羧基末端65個氨基酸(大鼠63個氨基酸)組成的胞內區，為信息傳遞所必需[2、3]。在卵泡發育過程中，顆粒細胞膜上的FSHR數量保持相對的恒定，如果FSHR功能被抑制，卵泡因發育障礙而發生異常閉鎖，從而導致卵巢功能的減退。

卵巢早衰(POF)[4]的主要臨床特征之一是患者血液中FSH水平的異常升高，提示POF患者卵巢組織對FSH的敏感性降低或消失。已有基于人群的研究證實，FSHR基因突變會導致遺傳性卵巢早衰[5]。現有技術中僅僅研究了在實驗動物體內誘導FSHR抗體對雄性小鼠生育力的影響以及遺傳修飾的POF小鼠模型[6、7]。

因此，本領域急需能夠用于研究POF且簡便易得的哺乳動物模型。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雌性非人哺乳動物模型以及所述模型在性成熟前卵巢早衰的治療和特異治療藥物的篩選中的應用。

在第一方面，本發明提供卵巢早衰的非人哺乳動物模型的制備方法，該方法利用衍生自FSHR的免疫原，免疫非人雌性哺乳動物得到所述卵巢早衰的非人哺乳動物模型。

在優選的實施方式中，所述衍生自FSHR的免疫原包括選自下組的多肽：

(a)序列如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:4所示的多肽；

(b)包含(a)所限定的序列經過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽。

在優選的實施方式中，所述多肽包含(a)所限定的序列經過1-3個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有(a)所限定的多肽功能。

在優選的實施方式中，所述非人哺乳動物是嚙齒類動物或靈長類動物；在另一優選的實施方式中，所述非人哺乳動物是小鼠、大鼠、豚鼠、家兔或猴，優選大鼠。

在優選的實施方式中，所述免疫通過口服、含服、噴霧、經鼻腔、經皮等方式實施。

在優選的實施方式中，所述免疫進行一次或多次；優選進行三次。

在優選的實施方式中，與正常的非人哺乳動物相比，所述非人哺乳動物模型血液中的雌二醇水平有統計學顯著的降低和/或FSH水平有統計學顯著的升高和/或所述非人哺乳動物模型的后代窩仔數有統計學顯著的降低。

在優選的實施方式中，所述雌二醇水平有統計學顯著的降低是指與正常非人哺乳動物相比，所述非人哺乳動物模型血液中的雌二醇水平降低50%以上，優選50-90%，更優選70-80%。

在優選的實施方式中，所述FSH水平有統計學顯著的升高是指與正常非人哺乳動物相比，所述非人哺乳動物模型血液中的FSH水平升高20%以上，優選20%-50%，更優選30-40%。

在優選的實施方式中，所述后代窩仔數有統計學顯著的降低是指與正常非人哺乳動物相比，所述非人哺乳動物模型的窩仔數降低50%以上，優選50-90%，更優選70-80%。

在第二方面，本發明提供第一方面所述方法制備的卵巢早衰非人哺乳動物模型在篩選卵巢早衰治療藥物中的應用。

在第三方面，本發明提供篩選卵巢早衰治療藥物的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)將待測物質給予第一方面所述方法制備的卵巢早衰非人哺乳動物模型；和

(b)檢測所述動物模型中的雌二醇或FSH水平；

如果與給予待測物質前的對照動物模型相比，給予待測物質的非人哺乳動物模型中所述雌二醇有統計學顯著的升高和/或FSH濃度有統計學顯著的降低，則待測物質是卵巢早衰治療藥物。

在優選的實施方式中，所述給予方法是口服、含服、噴霧或經皮給藥。