[發明專利]電噴霧萃取電離串聯質譜快速檢測尿中1-OHP的方法

有效

• 申請號: 201210188912.7
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN102721733B
• 公開（公告）日: 2014-12-31
• 發明（設計）人: 李雪;陳煥文;李銀萍;方小偉;于志強;傅家謨
• 申請（專利權）人: 上海大學;東華理工大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 何文欣

技術領域

本發明涉及尿中1羥基芘（1-OHP）的檢測方法，特別涉及一種電噴霧萃取電離串聯質譜快速檢測尿中1-OHP的方法，屬于多環芳烴生物標志物的分析檢測手段。

背景技術

尿中1-OHP是致癌性環境污染物多環芳烴（PAHs）的重要生物標志物，在人體對PAHs暴露及健康風險評價研究（如PAHs分子流行病學）中意義重大。

目前文獻報道的尿中1-OHP的分析方法包括：高效液相色譜熒光光譜法（high?performance?liquid?chromatography?fluorescence?detection，HPLC-FD）、RTF、SFS、共振光散射法（resonance?light?scattering?spectroscopy，RLS）、氣相色譜（氫火焰離子化檢測器）（gas?chromatography?flame?ionization?detection，GC-FID）、氣相色譜質譜法（gas?chromatography?mass?spectrometry，GC-MS）、液相色譜質譜法（liquid?chromatography?mass?spectrometry，LC-MS）、毛細管電泳（紫外檢測器）（capillary?electrophoresis）、化學發光法（chemiluminescence）、電化學法（electrochemistry）、光譜電化學法（spectroelectrochemical?sensing）、免疫學法（immunologic?methods）、放射免疫學法（radioimmunoassay）、免疫化學法（immunochemical?assay）等。

在上述方法中，盡管上述分析檢測技術均能實現OH-PAHs的定性定量分析，且靈敏度、準確度等結果互可比擬。但是考慮到操作簡易程度、儀器設備可獲取性、技術成熟度等因素，HPLC是目前最常用的檢測技術。另一方面，基于MS檢測技術的LC-MS（包括LC-MS/MS）和GC-MS（包括GC-MS/MS），由于MS檢測結果可以提供分子結構信息，因此在方法特異性上具有其它檢測技術不可比擬的優勢。此外，因為GC-MS和LC-MS已在實驗室較為普及，因此也是目前常用的OH-PAHs檢測手段。

然而，現有尿中1-OHP分析方法普遍存在樣品前處理和色譜環節耗時較長，無法滿足PAHs健康風險評價（如PAHs分子流行病學）中高通量樣品分析的迫切需求。

發明內容

本發明的目的在于避免現有尿中1-OHP檢測方法前處理過程繁瑣、分析周期較長而提供一種電噴霧萃取電離串聯質譜快速檢測尿中1-OHP的方法。本發明可實現尿中1-OHP的快速定量，能夠滿足PAHs健康風險評價（如PAHs分子流行病學）中高通量樣品分析的迫切需求。

本發明所述的檢測方法是借助電噴霧萃取電離（EESI）源和商品化儀器LTQ-XL型線性離子阱質譜儀，進行無樣品前處理條件下、尿中1-OHP的快速檢測。?

本發明是通過如下技術方案實現的：

（1）1-OHP母液的配制：準確稱取10.0?±?0.5?mg?1-OHP，置入大瓶中，加入甲醇溶解，得到濃度為100?±?5mg?L^–1的1-OHP母液。將母液轉移至棕色小瓶中，4?±?0.2?^oC密封避光保存。

（2）1-OHP標液的配制：移取有效體積1-OHP母液，用甲醇稀釋為濃度20?±?1μg?L^–1的1-OHP標液，將標液轉移至棕色小瓶中，4?±?0.2?^oC密封避光保存。

（3）加標尿樣的準備：取有效體積1-OHP母液（100?mg?L^–1），用尿樣逐級稀釋，得到1-OHP加標濃度為0.01–5?mg?L^–1的加標尿樣。加標后尿中1-OHP濃度約為未加標前尿（水解尿樣）1-OHP濃度的1.5–3.0倍最佳。

加標尿樣是為EESI-MS定量測定尿中1-OHP時所用的標準加入法所備。配制加標尿樣所用的尿樣為水解后的尿樣。采用水解尿樣的原因是，尿中排出的1-OHP主要是結合態1-OHP（如1-OHP和葡糖苷酸的結合物），需水解尿樣后，才可得到游離態1-OHP，進行檢測。