[發(fā)明專利]電噴霧萃取電離串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測尿中1-OHP的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210188912.7
• 申請日: 2012-06-11
• 公開（公告）號: CN102721733B
• 公開（公告）日: 2014-12-31
• 發(fā)明（設計）人: 李雪;陳煥文;李銀萍;方小偉;于志強;傅家謨
• 申請（專利權）人: 上海大學;東華理工大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 何文欣

1.一種電噴霧萃取電離串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測尿中1-OHP的方法，其特征在于借助電噴霧萃取電離EESI源和商業(yè)化儀器LTQ-XL型線性離子阱質(zhì)譜儀，尿樣直接進行電噴霧萃取電離串聯(lián)質(zhì)譜檢測，具體操作步驟如下：

（1）1-OHP母液的配制：準確稱取10.0?±?0.5?mg?1-OHP，置入大瓶中，加入甲醇溶解，得到濃度為100?±?5mg?L^–1的1-OHP母液；將該母液轉(zhuǎn)移至棕色小瓶中，4±?0.2?^oC密封避光保存；

（2）1-OHP標液的配制：移取有效體積1-OHP母液，用甲醇稀釋為濃度20?±?1?μg?L^–1的1-OHP標液，將該標液轉(zhuǎn)移至棕色小瓶中，4?±?0.2?^oC密封避光保存；

（3）加標尿樣的準備：取有效體積1-OHP母液，濃度為100?±?0.5?mg?L^–1，用尿樣逐級稀釋，得到1-OHP加標濃度為0.01–5?mg?L^–1的加標尿樣；加標后尿中1-OHP濃度為未加標前尿，即水解尿樣1-OHP濃度的1.5–3.0倍；

（4）EESI源參數(shù)的設置：ESI溶劑管路和樣品溶液管路間的距離與角度分別為1–2?mm和40–70^o，二者與質(zhì)譜儀金屬離子傳輸管入口的距離和角度分別為6–15?mm和145–160^o；初級ESI溶劑為含有1.0?×?10^–3–1.0?×?10^–2?M醋酸銨或7.0?×?10^–3–1.5?×?10^–1?M氨水的甲醇水混合溶劑，體積比大于95%，流速1–4μL?min^–1；樣品溶液流速4–7μL?min^–1；ESI電壓–?3–?–?4?kV；金屬離子傳輸管溫度350–400?^oC；樣品霧化氣為高純氮氣，純度99.999%，壓力1.0–1.4?MPa；

（5）串聯(lián)質(zhì)譜MS/MS參數(shù)的設置：負離子檢測模式；母離子m/z?217；母離子隔離寬度2.0；活化值Q為0.40–0.50，碰撞能量NCE為35–55%，碰撞時間?30?ms；質(zhì)量數(shù)掃描范圍50–350；離子阱最大離子注入時間?200?ms；實際注入離子量由自動獲取控制確定；碰撞氣He氣，離子阱內(nèi)壓力0.82–0.83?×?10^–5?Torr；離子透鏡其它MS條件由LTQ-XL-MS自動優(yōu)化得到；

（6）樣品檢測：在相同EESI-MS/MS條件下，分別分析溶劑空白、1-OHP標液、未加標尿樣和梯度濃度加標尿樣；每次進樣0.5?min，平行進樣6次；測定MS/MS譜圖中m/z?217、m/z?189處質(zhì)譜峰強度，進行定性定量分析；m/z?189處質(zhì)譜峰是1-OHP分子離子二級質(zhì)譜碎片離子；

（7）數(shù)據(jù)處理：包括（a）定性分析和（b）定量分析兩部分：

（a）定性分析：以1-OHP標液MS/MS譜圖中m/z?189和m/z?217處質(zhì)譜峰強度比值為參照，對比樣品MS/MS譜圖中m/z?189和m/z?217處質(zhì)譜峰強度比值，確認樣品中1-OHP是否被檢出；

（b）定量分析：采用標準加入法定量尿中1-OHP，同時，為減少EESI源和質(zhì)譜儀長期操作對1-OHP信號響應的影響、提高分析結果的穩(wěn)定性，在初級ESI溶劑中加入濃度為0.1?mg?L^–1的OHP的氘代1-OHP，MS/MS檢測D₉-1-OHP?的目標離子為D₉-1-OHP的碎片離子M–H–28，m/z?198，MS/MS分析條件與1-OHP相同；

以未加標/加標尿樣MS/MS譜圖中m/z?189和m/z?198處質(zhì)譜峰強度比值為縱坐標（Y），以1-OHP加標濃度為橫坐標（X），對實驗數(shù)據(jù)進行線性回歸分析，得到線性回歸方程Y?=?aX

+?b；Y?＝0時得到X的絕對值?，此絕對值即為尿中1-OHP濃度。