[發(fā)明專利]構(gòu)建核酸庫的方法、試劑及試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210188750.7
• 申請日: 2012-07-11
• 公開（公告）號: CN102703432A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王焱
• 申請（專利權(quán)）人: 煙臺博諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種隨機(jī)斷裂并同時標(biāo)記DNA片段的方法，其特征在于，包括以下步驟:轉(zhuǎn)座酶、雙鏈轉(zhuǎn)座子及目標(biāo)DNA混合后進(jìn)行反應(yīng)，就是在轉(zhuǎn)座酶的催化作用下，雙鏈的轉(zhuǎn)座子末端序列隨機(jī)插入目標(biāo)DNA?序列中；形成被轉(zhuǎn)座子末端序列標(biāo)記的DNA片段，這些片段從5'至3'，始于雙鏈轉(zhuǎn)座子末端序列，繼而是9個堿基對的單鏈DNA序列，然后是雙鏈目標(biāo)DNA片段，9個堿基對BP的單鏈DNA序列和雙鏈轉(zhuǎn)座子末端;將標(biāo)記于目標(biāo)DNA兩端的轉(zhuǎn)座子末端序列的雙鏈解開成單鏈.去除單鏈轉(zhuǎn)座子末端序列，生成未標(biāo)記的DNA片段.在未標(biāo)記的DNA片斷上連接需要的DNA標(biāo)簽，產(chǎn)生一個有新的標(biāo)簽的DNA片段。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，雙鏈轉(zhuǎn)座子末端是通過高溫形成單鏈。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，用單鏈外切核酸酶來去除單鏈的轉(zhuǎn)座末端序列。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在未標(biāo)記的DNA片斷上連接需要的DNA標(biāo)簽是用DNA連接酶來實現(xiàn)的。

5.?如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述DNA連接酶是T4?DNA?連接酶，T7?DNA?連接酶，或是TAQDNA?聚合酶。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的標(biāo)簽為選自測序標(biāo)簽，barcode標(biāo)簽，酶切位點標(biāo)記，捕捉標(biāo)記，檢測標(biāo)記，擴(kuò)增標(biāo)記，或轉(zhuǎn)錄啟動子序列標(biāo)簽中的一種或一種以上。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，多個標(biāo)簽可以連接在一起使用。

8.一種使用權(quán)利要求1-7方法的用于隨機(jī)斷裂，并形成有標(biāo)記的DNA片段的試劑盒，其中包括純化的轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座子末端，特定單鏈DNA核酸酶，DNA聚合酶，DNA連接酶以及所需的標(biāo)簽。